高效液相色谱法测定血浆中环磷酰胺浓度.docx

高效液相色谱法测定血浆中环磷酰胺浓度[摘要]目的：建立血浆中环磷酰胺浓度的高效液相色谱测定法。方法：样品经甲醇沉淀蛋白离心后取上清液直接进样。色谱柱：Shim-packCLC-ODS柱(150mm×6mm5μm)；流动相：甲醇－水（1∶1v/v)；流速：1.0ml/min；检测波长：325nm。异环磷酰胺为内标。结果：环磷酰胺最低检出量为5mg/L平均回收率为96.4%±2.31%。结论：本方法简易、快捷、准确适用于临床血药监测。[关键词]高效液相色谱法；血浆；环磷酰胺浓度[中图分类号]R979.1[文献标识码]A[文章编号]1673-7210（2007）05（b）-137-02环磷酰胺(CTX)是氮芥类烷化剂为常用化疗药物广泛用于各种肿瘤的治疗。环磷酞胺经肝脏微粒体氧化酶系代谢为有抗癌活性的代谢产物而发挥作用。化疗药物一般毒性较大治疗指数较窄需要通过药物监测来设计个体化给药方案从而保证患者的用药安全。以往的报道HPLC测定法大多采用乙睛-水为流动相[1]本实验采用甲醇－水为流动相运用高效液相色谱法测定血浆中CTX的浓度快捷、准确适用于临床血药浓度监测。1材料与方法1.1材料高效液相色谱仪：Waters公司510型泵991型紫外二极管阵列检测器U6K进样阀。环磷酞胺标准品(中国药品生物制品检定所)异环磷酰胺(Ifo)对照品CP级其他试剂AR级。1.2方法1.2.1色谱条件色谱柱：Shim-packCLC-ODS柱(150mm×6mm5μm)；流动相：甲醇－水（1∶1v/v)；流速：1.0ml/min；检测波长：325nm。1.2.2标准液制备CTX标准液：精密称取CTX标准品50mg于100ml量瓶中蒸馏水溶解定容浓度为500μg/ml。Ifo对照液：精密称取Ifo对照品5mg于100ml量瓶中蒸馏水溶解定容浓度为50μg/ml。1.2.3样品处理我院2006年11月~2007年1月期间收住院用药患者静脉注射CTX800ml后1h取上肢静脉血2ml离心取血浆0.5ml加入甲醇溶液3ml振荡离心4000r/min15min取上清液20μl直接进样。1.2.4标准曲线制备取健康人血浆制备标准曲线取健康人空白血浆8份。每份0.5ml分别加入CTX标准液0.2、0.5、1.0、2.0、4.0、10、20μl和Ifo对照液10μl再分别加入甲醇溶液按1.2.3进行后序操作以CTX浓度C为横坐标AZA与内标峰高比s为纵坐标绘制标准曲线。2结果2.1色谱图(图1、2、3)2.2精密度和重现性据标准曲线项下制备三种不同浓度样本同一浓度样本在5d内测定计算日间误差。同一天5次内测定样本计算日内误差(表1)。2.3干扰试验临床上常与CTX联合用药有环孢素A、强的松、甲基强的松龙等。分别取其标准对照品加入正常人血浆中按1.2.3方法处理后进样结果样品进样后10min内未出现吸收峰不干扰CTX的测定。2.4方法回收率取健康人血浆0.5ml分别加入三种不同量的CTX标准液及Ifo对照液10μl按1.2.3制备所得溶液各测定5次(表2)。2.5最低检出量按信噪比≥2计算CTX的最低检出量分为5μg/ml。3讨论CTX是临床应用最广泛的肿瘤化疗药之一经肝脏代谢为磷酰胺氮芥后发挥作用但是大剂量CTX在肝脏的代谢支路常会饱和此时其在肝脏灭活的代谢支路会产生氯乙醛等代谢产物[2]因此CTX达到一定量后用量的增加不会增加疗效而只会产生更大毒副反应故对环磷酞胺进行血药浓度监测十分必要。目前对CTX的药动学与药效、毒性的关系尚不十分清楚。CTX原药直接从肾脏排泄的量不超过20%而其活性代谢产物很不稳定故临床上常规检测其活性代谢产物较困难。已发展的检测主要非活性代谢产物氯乙醛的检测方法[3]很难确切评价CTX的药效与毒性不过可从CTX和氯乙醛的监测推测其活化比例以探求母体药物的药动学与药效、毒性的关系。本实验的结果表明CTX与内标分离良好色谱峰型良好不受血浆成分干扰线性良好日内及日间误差均符合要求。样品采用甲醇沉淀蛋白方法简便回收率高。本方法简易、快捷、准确是适用于检测CTX血浆浓度的方法。[参考文献][1]葛永前陆国椿凌云华.HPLC法测定人血浆中环磷酞胺的浓度[M].复旦学报(医学版)200229(3):213-215.[2]Boddy