反相高效液相色谱法测定血浆中帕罗西汀浓度.docx

反相高效液相色谱法测定血浆中帕罗西汀浓度摘要目的：建立高效液相色谱法测定血浆中帕罗西汀浓度的方法。方法：采用岛津LC-VP型高效液相色谱仪YWG-C18柱（250mm×4.6mm5μm）；柱温：25℃；激发波长为295nm发射波长为350nm；流动相为乙腈和pH3.2的25mM的磷酸盐缓冲液（35∶65v/v）；流速为1mL/min。采用内标法。结果：帕罗西汀的血浆线性范围是2.5～100ng/mLr=0.9989平均回收率为91.37%稳定性RSD均小于8%。结论：本方法灵敏度高分离效果佳方便实用。关键词高效液相色谱法帕罗西汀血药浓度中图分类号：R917文献标识码：B文章编号：1006-1533(2007)09-0417-02帕罗西汀是目前市场上广泛应用的一种5-羟色胺再摄取抑制剂（SSRI）是目前抗抑郁治疗的主要药物。帕罗西汀的疗效和不良反应与其血药浓度有明显相关性并且血药浓度个体差异非常大常规剂量下血药浓度范围可从10ng/mL波动至30ng/mL这就需要对药物进行治疗药物浓度测定以保证个体能达到有效的血药浓度保证疗效。帕罗西汀血药浓度测定有多种方法如HPLC-MS、HPLC-FL、HPLC-UV［1～3］但这些方法往往步骤繁琐或成本较高不适合常规应用。本文介绍一种操作简便、成本低廉、适用于常规应用的反相高效液相色谱法来测定血浆中帕罗西汀的浓度。1仪器与试药1.1仪器日本岛津LC-VP型高效液相色谱仪包括LC-10ATVP输液泵、RF-10AXL荧光检测器、CLASS-VP色谱工作站、DGU-12A在线脱气机；80-2台式离心机（上海手术器械厂）。1.2试药帕罗西汀标准品（浙江尖峰药业有限公司提供批号：20070111）；氟西汀标准品（常州四药制药有限公司提供批号：20061210）（内标物）；甲醇（色谱纯）；乙腈（色谱纯）；其余试剂均为分析纯。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：反相YWG-C18柱（250mm×4.6mm5μm）；柱温：25℃；激发波长为295nm发射波长为350nm；流动相为乙腈和pH3.2的25mM的磷酸盐缓冲液（35∶65v/v）；流速为1mL/min；进样量为50μL。2.2标准溶液制备精密称取帕罗西汀标准品置于容量瓶中用甲醇溶解配成1mg/mL的标准溶液于-20℃储存备用。精密称取内标物氟西汀标准品置于容量瓶中用甲醇溶解配成1mg/mL的标准溶液于-20℃储存备用。2.3血浆样品处理精密吸取血浆样品1mL加0.2mL的0.1MNaOH加入50μL的内标物摇匀加乙醚3mL旋涡振荡3min以3000转/min的速度离心10min静置10min分离有机层。重复萃取1次合并上层液于37℃水浴中氮气流吹干残余物用200μL流动相溶解取50μL进样。帕罗西汀保留时间约为10.35min内标氟西汀保留时间约为12.11min。两者分离完好无血浆内源物干扰。2.4标准曲线及最低检测限取1mL空白血浆7份加50μL的内标物定量（50μL）加入帕罗西汀标准溶液混合均匀使其浓度分别为2.5、5.0、10.0、25.0、50.0、75.0、100.0ng/mL。按血浆样品处理项进行操作测定帕罗西汀和内标物的峰面积以浓度对峰面积比值进行回归得到标准曲线方程：Y＝24.918+18.876Xr=0.9989本方法的最低检测限是1.0ng/mL（最低检测浓度为仪器信号噪音的3倍）。2.5提取回收率取1mL空白血浆3份加50μL的内标物定量（50μL）加入帕罗西汀标准溶液混合均匀使其浓度分别为2.5、50、100ng/mL按血浆样品处理项进行操作得到峰面积比值。取标准溶液用流动相稀释成上述3个浓度加50μL的内标物混合均匀后不经提取直接取50μL进行进样得到峰面积比值。两个峰面积比即为提取回收率。结果见表1。2.6精密度取空白血浆溶液按照提取回收率项下配制低、中、高这3种浓度(2.510100ng/mL)按血浆样品处理项操作在1d内分别重复进样5次得3种浓度的日内重复性。在5d内分别每天重复进样得3种浓度的日间重复性。结果见表2。2.7稳定性取空白血浆按照回收率项下配制低、中、高这3种浓度(2.550100ng/mL)。放置于室温分别于1h、2h、4h、6h和8h进行处理进样测定评价室温下的稳定性。同样配制上述3种浓