高效液相色谱法测定人血浆中全反式维甲酸血药浓度.docx

高效液相色谱法测定人血浆中全反式维甲酸血药浓度【关键词】血药浓度摘要:目的建立高效液相色谱法测定人血浆中全反式维甲酸浓度。方法色谱柱为SupelcosilLC18DB柱(5μm,4.6mm×250mm);流动相为甲醇水冰乙酸(体积比82∶17∶1);柱温为室温;流速1.5mL・min-1;检测波长为340nm。结果全反式维甲酸血药质量浓度在10～1000ng・mL-1范围内，与峰面积比有良好的线性关系(r=0.9997)，最低检测浓度为2.5ng・mL-1。平均方法回收率为(94.5±4.7)%(n=15)。日内RSD≤4.1%，日间RSD≤6.2%。结论本方法简单、快速、灵敏、重现性好，适用于全反式维甲酸临床血药浓度监测及人体药代动力学研究。关键词:全反式维甲酸;血药浓度;高效液相色谱法Abstract:ObjectiveToestablishaHPLCmethodfordeterminationofalltransretinoicacidinhumanplasma.MethodsASupelcosilLC18DBcolumn(5μm,4.6mm×250mm)wasadopted.Mobilephasewasamixtureofmethanol,waterandglacialaceticacid(82∶17∶1).Theflowratewas1.5mL・min-1.TheUVdetectionwavewas340nm.ResultsTheassayprocedurewasshowntoproducelinearcalibrationcurvesovertherangeof10ng・mL-1to1000ng・mL-1ofalltransretinoicacidinplasma(r=0.9997).Withintherange,therecoveryratewas(94.5±4.7)%,andtheintradayRSDandinterdaywaslessthan4.1%and6.2%,respectively.Thedetectionlimitofalltransretinoicacidwas2.5ng・mL-1.ConclusionsThismethodisrepeatable,convenientandsensitiveforplasmaconcentrationmonitoringandclinicalpharmacokineticsstudyofalltransretinoicacid.Keywords:alltransretinoicacid;plasmaconcentration;HPLC全反式维甲酸(alltransretinoicacid,ATRA)是维生素A的天然氧化代谢产物，可抑制白血病细胞的增殖，诱导白血病细胞分化成熟，是目前治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)的有效药物。ATRA对APL初发患者完全缓解率可达85%以上，但对复发患者再次应用ATRA则效果不佳，其原因可能是ATRA对参与其代谢的'酶活性具有自身诱导作用，持续用药导致血药浓度逐步降低[1]。本文参考文献[2-4]，建立了一种灵敏、准确的ATRA血药浓度HPLC测定法，旨在为全反式维甲酸临床血药浓度监测及人体药代动力学研究提供测定方法。1材料与方法1.1仪器Waters高效液相色谱仪(515型恒流泵，486型紫外检测器，Millennium32色谱工作站);XW―80A旋涡混合器(上海医科大学仪器厂);3K18高速冷冻离心机(Sigma);高速离心机(美国雅培公司TDx仪附件)。1.2药品与试剂ATRA对照品(Sigma,纯度：98%)，阿维A酸(内标，罗氏公司)，甲醇为色谱纯试剂，其余试剂均为分析纯。1.3色谱条件色谱柱为SupelcosilLC18DB柱(5μm，4.6mm×250mm);柱温为室温。流动相：甲醇水冰乙酸(体积比82∶17∶1);流速1.5mL・min-1。检测波长340nm。1.4血药浓度测定法1.4.1ATRA对照溶液配制精密称取ATRA对照品适量，以甲醇溶解并定容，制得浓度为100μg・mL-1的ATRA储备液。将ATRA储备液以甲醇稀释，配制浓度分别为0.5、1、2.5、5、10、25、50μg・mL-1的ATRA对照溶液。1.4.2内标液配制取内标阿维A酸适量，置于100mL量瓶中，以甲醇溶解并定容，制得浓度为7.5μg・mL-1的内标液。1.4.3样本处理精密吸取血浆样品1mL，置10mL具塞离心试管中，加入内标溶液20μL，旋涡混合30s。加入1mol・L-1的HCl溶液500μL，漩涡混合30s，再加入乙酸乙酯3mL，旋涡混合1min，4500r/min离心5min。转移上层液至尖底试管中，于37℃水浴中氮气