高效液相色谱法测定人血浆中二甲双胍的含量.docx

高效液相色谱法测定人血浆中二甲双胍的含量【摘要】目的建立测定人血浆中二甲双胍浓度的HPLC-UV方法。方法采用高氯酸直接沉淀测定血浆中二甲双胍的浓度。结果血浆中杂质不干扰样品峰1.25、0.125及0.025μg/ml的回收率分别为93.9%、92.6%及91.4%；1.250、0.25和0.025μg/ml的日内变异分别为：1.33%、4.08%及7.94%；日间变异分别为：4.56%、2.78%及2.19%；线性范围0.0125～2.50μg/ml最低检测限0.0125μg/ml；血浆中二甲双胍冻融试验稳定。结论该方法稳定且精密度好准确可靠适用于二甲双胍血浆浓度测定。【关键词】二甲双胍；高效液相色谱法二甲双胍（metformin）是双胍类口服降糖药它主要作用于胰岛外组织抑制肠吸收葡萄糖增加外周组织对葡萄糖的利用减少肝糖原异生达到降血糖的目的适合2型糖尿病患者。文献报道常用的检测方法是高效液相色谱法［1～3］常用内标为阿替洛尔［13］。流动相常加入的离子对试剂如十二烷基硫酸钠［1］、庚烷磺酸钠［2］和辛烷磺酸钠［4］。本文建立一种在流动相中加入十二烷基硫酸钠采用高氯酸直接沉淀测定其浓度的一种简易方法。1实验材料1.1试验药品及试剂二甲双胍标准品：中国药品生物制品检定所提供。乙腈（色谱纯）：FisherCompanyIncUSA;其余试剂均为市售分析纯。1.2仪器Shimadzu高效液相色谱仪：CBM-10A系统控制器；LC-10ATvp泵；DGU-12A除气机；CTO-10Avp柱温箱；SPD-12AV紫外检测器；Milli-QGradientA10超纯水器（MilliporeIncUSA)。2血浆中二甲双胍的HPLC法测定2.1色谱条件流动相由水相（4mmol/L十二烷基硫酸钠0.02mol/LNaH2PO40.5%三乙胺用H3PO4调pH为4.0）-乙腈（74：26v/v）组成流速1.0ml/min；色谱柱为DiscoveryODS5.0μm4.6×250mmI.D.;柱温箱温度40℃。2.2血浆样品的提取与分离取血浆0.5ml加入0.1ml30%高氯酸振荡1min离心（18000r/m×10min)取20μl进样用样品的峰面积进行定量分析。2.3方法的专属性在本试验条件下盐酸二甲双胍有较大的色谱峰和较好的分离度血浆中杂质不干扰样品峰基线噪音小（S／N＞3）盐酸二甲双胍的保留时间约为8.08min（见图1）。2.4血浆中二甲双胍标准工作曲线制备及其最低检测浓度测定取空白血浆0.5ml加不同量的标准品使其浓度分别为0.0125、0.025、0.05、0.125、0.25、0.625、1.25和2.50μg/ml按“血浆样品的提取与分离”项下操作记录样品峰面积利用样品浓度C对样品峰面积作直线回归得回归方程A=54.608+47164Cr=0.9999（P3）、样品处理简单、成本较低等特点。所得二甲双胍色谱峰形对称且无肩峰采用峰面积对浓度回归相关性较好。最低定量限为0.0125μg/ml适用于二甲双胍血浆浓度测定。【参考文献】1秦峰雄志立孙苏亚等.盐酸二甲双胍片缓解片人体药代动力学及生物利用度.药物分析杂志200525（3）：258-262.2厉伟兰刘晓东谢林等.二甲双胍缓释片人体药代动力学及其相对生物利用度.江苏药学与临床研究200614(2):4-7.3魏敏吉吕媛康子胜等.复方盐酸二甲双胍片在健康人体的药代动力学和相对生物利用度.中国临床药理学杂志200521(93):41-45.4赵春丽刘建芳胡玉钦等.盐酸二甲双胍肠溶片的人体相对生物利用度.中国临床药学杂志200413(1):25-27.