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高效液相色谱法在鱼药残留测定中的应用【摘要】为了防范和治疗疾病在养殖过程中对鱼用药是不可避免的但鱼体内的药物残留问题也受到大家的重视。人们建立了许多测定鱼药残留的方法高效液相色谱法就是其中之一。本文结合具体试验介绍了高效液相色谱法在鱼药残留测定中的应用。结果表明：该方法具有灵敏、准确、简便、快速等优点适用于鱼药残留的检测。【关键词】药物残留；测定；磺胺类药物；高效液相色谱法近年来我国水产养殖业发展迅速其集约化的程度提高的很快可是随着该产业的发展水质渐趋恶化疾病的预防与治疗问题变得颇为紧迫因此越来越多地对于鱼进行用药但鱼产品中的药物残留状况不乐观。为了让消费者用上放心的鱼产品就必须加强鱼药残留的测定工作。目前动物性食品中兽药残留量的测定主要有分光光度法、示波极谱法、毛细管电泳法、高效液相色谱法、气相色谱法和高效液相色谱-质谱法等。下面就结合具体试验介绍高效液相色谱法在鱼药残留测定中的应用。1.试验部分1.1仪器与试剂Waters2695高效液相色谱仪配2487紫外检测器；ALLEGRATM21R高速冷冻离心机；BuchiR-205Advance旋转式蒸发仪。喹酸、磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺二甲氧嘧啶、萘啶酸、呋喃唑酮标准储备溶液：分别称取各标准品0.0100g用乙腈（1+1）溶液溶解后定容至100ML配成100mg・L-1标准储备溶液。用时用乙腈稀释配成所需浓度。乙腈、甲醇、乙酸均为色谱纯；其余试剂为分析纯；试验用水为超纯水。1.2色谱条件WatersSymmetryC18色谱柱（250MM×4.6mm5μm）柱温35℃流量1.0mL・Min-1检测波长265nM进样量20μL。流动相A为乙腈B为0.08mol・L-1乙酸溶液梯度洗脱程序：0～10minA由10%升至60%保持10Min；20～20.05minA由60%降至10%保持9.95min。1.3试验方法1.3.1样品提取称取鱼肉试样5.000g于50mL离心管中加入乙腈20mL及经650℃烘干的无水硫酸钠10g涡旋振荡2min以10000r・min-1转速离心10min上清液转移至125mL分液漏斗中。残渣中加入乙腈20mL按上述方法再提取一次上清液合并于分液漏斗中。1.3.2脱脂加正己烷30mL于分液漏斗中加塞剧烈振荡5min充分静置分液收集乙腈层（下层）于250mL旋转蒸发瓶中加入正丙醇5mL于40℃水浴条件下减压旋转蒸发至干。1.3.3净化1）中性氧化铝柱净化：中性氧化铝柱使用前用乙腈-水（95+5）溶液10mL预洗并活化。测定磺胺类和呋喃唑酮药物时将第1.3.2节中的残渣用乙腈-水（95+5）溶液5mL溶解旋转蒸发瓶内试样稀释液过柱收集稀释液至另一旋转蒸发瓶中并于40℃水浴条件下减压旋转蒸发至干。往旋转蒸发瓶中加入乙腈-水（4+6）溶液1mL溶解残渣以10000r・min-1转速离心10min上清液经0.45μm微孔滤膜过膜滤液在色谱条件下进行分析。2）C18柱净化：测定喹酸和萘啶酸药物时取1.3.2节中的残渣用0.05mol・L-1磷酸二氢钠溶液5mL溶解C18固相萃取柱先后用10mL甲醇和0.05mol・L-1磷酸二氢钠溶液10mL预洗并活化。旋转蒸发瓶内试样稀释液过柱再用0.05mol・L-1磷酸二氢钠溶液10ML清洗C18柱弃掉流出液。2.结果与讨论2.1色谱柱的选择磺胺类、喹诺酮类和呋喃唑酮的分离通常采用C18反相柱试验对AgilentSBC18柱、AgilentTCC18柱、SunfireC18柱和SymmetryC18柱的分离效果进行了考察。结果表明：除AgilentTCC18柱的分离过程中有小的杂质峰出现外其它3种色谱柱均可实现基质和药物的较好分离；比较基线的水平性和色谱峰的响应值SymmetryC18柱的分离效果较好试验选择SymmetryC18柱为色谱分离柱。2.2流动相组成及洗脱程序的选择磺胺类药物含有氨基、苯磺酰胺结构具有弱碱性；喹诺酮类药物是两性化合物；呋喃唑酮结构中也含有两性基团因此调节流动相的pH值可抑制弱碱的离解从而改变色谱峰的保留时间。结果表明：酸度过高磺胺类药物较难完全分离且对色谱柱有所损伤；酸度过低色谱峰会出现明显拖尾现象试验选择0.08mol・L-1乙酸溶液控制流动相酸度。乙腈与乙酸溶液以不同体积比组成的混合溶液影响保留时间和峰形。由于萘啶酸极性较小C18色谱柱对其吸附较强以乙腈-0.08mol・L-1乙酸（15+85）混合溶液为流动相