一种制备透明质酸纳米微球的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103848995103848995A(43)申请公布日2014.06.11(21)申请号201210516294.4(22)申请日2012.12.04(71)申请人南京理工大学地址210094江苏省南京市孝陵卫200号(72)发明人谈华平(74)专利代理机构南京理工大学专利中心32203代理人朱显国(51)Int.Cl.C08J3/24(2006.01)C08L5/08(2006.01)C08B37/08(2006.01)B01J13/02(2006.01)A61K47/36(2006.01)权权利要求书1页利要求书1页说明书5页说明书5页附图3页附图3页(54)发明名称一种制备透明质酸纳米微球的方法(57)摘要本发明公开了一种制备透明质酸纳米微球材料的方法，提供了一种基于碱基配对作用交联透明质酸纳米微球的手段。采用反相乳液交联技术，通过碱基配对作用，实现了透明质酸纳米微球的交联，得到了结构稳定的透明质酸纳米微球。本发明避免使用了有毒化学交联剂，能保留被包埋药物的生物活性，可显著改善纳米微球材料的使用安全性。本发明工艺和设备简单、易行、操作安全，具有制备温度低、固化速度快、处理周期短等优点，在活性药物、蛋白或基因的包埋与传递方面有应用价值。CN103848995ACN1038495ACN103848995A权利要求书1/1页1.一种透明质酸纳米微球的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、室温下配制透明质酸水溶液，加入多磷酸酯，搅拌均匀；滴加胸腺嘧啶盐酸溶液，搅拌反应；步骤2、将反应完成后的透明质酸溶液冷却至沉淀析出未反应的胸腺嘧啶，然后用氨水将上清溶液调至中性，随后用乙酸乙酯进行萃取，最后将有机溶剂蒸干，得到胸腺嘧啶功能化透明质酸；步骤3、室温下配制透明质酸水溶液，加入多磷酸酯，搅拌均匀；滴加腺嘌呤盐酸溶液，搅拌反应；步骤4、将反应完成后的透明质酸溶液冷却，沉淀析出未反应的腺嘌呤，然后用氨水将上清溶液调至中性，随后用乙酸乙酯进行萃取，最后将有机溶剂蒸干，得到腺嘌呤功能化透明质酸；步骤5、分别将上述两种碱基功能化透明质酸溶于石蜡油，各自加入司班80，超声下混合乳化后搅拌挥发过夜；步骤6、将搅拌完成后的乳液倒入异丙醇中，待透明质酸纳米微球析出后进行高速离心，随后用异丙醇、正己烷和丙酮分别清洗，最后室温真空干燥。2.根据权利要求1所述的透明质酸纳米微球的制备方法，其特征在于，所述步骤1中透明质酸水溶液的质量/体积百分比为0.5~2%，胸腺嘧啶盐酸溶液的质量/体积百分比为0.04~0.2%；其中加入的多磷酸酯质量为透明质酸水溶液的1~4倍，胸腺嘧啶盐酸溶液的体积为透明质酸水溶液的1/5~1/2；在40~60oC下搅拌反应16~24小时。3.根据权利要求1所述的透明质酸纳米微球的制备方法，其特征在于，所述步骤3中透明质酸水溶液的质量/体积百分比为0.5~2%，腺嘌呤盐酸溶液的质量/体积百分比为0.04~0.2%；其中加入的多磷酸酯质量为透明质酸水溶液的1~4倍，腺嘌呤盐酸溶液的体积为透明质酸水溶液的1/5~1/2；在40~60oC下搅拌反应16~24小时。4.根据权利要求1所述的透明质酸纳米微球的制备方法，其特征在于，所述步骤5中制备出的碱基功能化透明质酸以质量/体积百分比为0.5~2.0%溶于石蜡油；加入的司班80为0.2~0.5毫升；两种碱基功能化透明质酸溶液按照体积比1/2~2/1混合；乳化时间为5~10分钟；搅拌转速为800~1500rpm。5.根据权利要求1所述的透明质酸纳米微球的制备方法，其特征在于，所述步骤6中异丙醇的体积为搅拌完成后的乳液的10倍以上。2CN103848995A说明书1/5页一种制备透明质酸纳米微球的方法技术领域[0001]本发明属于生物医用高分子材料领域，具体涉及一种利用碱基配对交联制备透明质酸纳米微球的方法。背景技术[0002]天然多聚糖纳米微球具有优异的生物相容性和可调的生物降解性，可用于药物、蛋白或基因的包埋和释放，目前已广泛用于药物控释、组织工程和再生医学等领域的研究。通常，药物在体内代谢较快，而频繁注射给药则会给病人带来极大的痛苦。选择合适的纳米微球体系，可实现药物在体内的缓慢释放，达到理想的治疗效果。在组织工程和再生医学领域，多聚糖纳米微球常用于包埋细胞生长因子和基因，提高细胞支架的生物活性，增加支架在体内的组织诱导能力。常用来制备纳米微球的多聚糖包括：透明质酸、海藻酸、硫酸软骨素、壳聚糖、淀粉及纤维素等。[0003]多聚糖纳米微球在制备工程中必须添加化学交联剂处理，其结构才能稳定。这些化学交联剂主要有多聚甲醛、戊二醛、水溶性碳化二亚胺和京尼平等，其作用是将多聚糖分子中的活性基团（氨基