改性脱细胞角膜基质及其改性方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105497985A(43)申请公布日2016.04.20(21)申请号201610040990.0(22)申请日2016.01.21(71)申请人武征地址511000广东省广州市南沙区环市大道西越秀滨海郡城29栋2202室(72)发明人武征赵巨鹏张建华(74)专利代理机构广州华进联合专利商标代理有限公司44224代理人王园园万志香(51)Int.Cl.A61L27/36(2006.01)A61L27/50(2006.01)权利要求书1页说明书11页附图1页(54)发明名称改性脱细胞角膜基质及其改性方法(57)摘要本发明属于组织工程领域，具体涉及一种改性脱细胞角膜基质及其改性方法。所述改性方法包括以下步骤：(1)将脱细胞角膜基质预处理；(2)用氨基酸与经过预处理的脱细胞角膜基质进行反应，对脱细胞角膜基质进行接枝改性；(3)将接枝改性后的脱细胞角膜基质进行后期处理，除去接枝改性处理过程中的残留物质，即得改性的脱细胞角膜基质。所述改性的脱细胞角膜基质既具有良好的机械性能、生物相容性，又具有优异的复水和保水性，植入后可快速恢复透明性，可以用于组织工程研究、临床角膜移植手术等。CN105497985ACN105497985A权利要求书1/1页1.一种脱细胞角膜基质的改性方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将脱细胞角膜基质预处理；(2)通过氨基酸与经过预处理的脱细胞角膜基质进行反应，对脱细胞角膜基质进行接枝改性；(3)将接枝改性后的脱细胞角膜基质进行后期处理，除去接枝改性过程中的残留物质，即得改性的脱细胞角膜基质。2.根据权利要求1所述的脱细胞角膜基质的改性方法，其特征在于，步骤(2)中所述的氨基酸选自天冬氨酸、谷氨酸、组氨酸、赖氨酸、精氨酸、脯氨酸或其衍生物、低聚物或高聚物中的一种或一种以上。3.根据权利要求1所述的脱细胞角膜基质的改性方法，其特征在于，步骤(2)中所述氨基酸的浓度为2μg/mL-2g/mL。4.根据权利要求1所述的脱细胞角膜基质的改性方法，其特征在于，步骤(2)中接枝改性时：先对脱细胞角膜基质和/或氨基酸用活化羧基或氨基的试剂进行活化，再将脱细胞角膜基质与氨基酸进行反应。5.根据权利要求4所述的脱细胞角膜基质的改性方法，其特征在于，所述活化羧基或氨基的试剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和/或N-羟基琥珀酰亚胺。6.根据权利要求4所述的脱细胞角膜基质的改性方法，其特征在于，将脱细胞角膜基质进行活化时的pH为4-8，将氨基酸进行活化时的pH为6-9，所述活化在超声波或微波的条件下进行。7.根据权利要求1-6任一项所述的脱细胞角膜基质的改性方法，其特征在于，步骤(2)中的反应在温度为0-65℃，pH为2.5-9的条件下进行；和/或步骤(2)中的反应在光催化、微波或超声波的条件下进行。8.根据权利要求1-6任一项所述的脱细胞角膜基质的改性方法，其特征在于，步骤(1)中所述的预处理包括如下的步骤A，或步骤A和步骤B，或步骤A～C：A、使用生理盐水、磷酸盐缓冲溶液或超纯水浸泡脱细胞角膜基质；B、用去离子水清洗浸泡后的脱细胞角膜基质；C、风干或冷冻干燥后，在干燥器中保存备用。9.根据权利要求1-6任一项所述的脱细胞角膜基质的改性方法，其特征在于，步骤(3)所述的后期处理的方法为：将接枝改性后的脱细胞角膜基质用去离子水、生理盐水或磷酸盐缓冲溶液冲洗，再用截留分子量为100～200000Da的透析装置进行透析，透析液为生理盐水、磷酸盐缓冲溶液或超纯水，最后经过灭菌即得。10.一种改性的脱细胞角膜基质，其特征在于，由权利要求1-9任一项所述的改性方法制备得到。2CN105497985A说明书1/11页改性脱细胞角膜基质及其改性方法技术领域[0001]本发明涉及组织工程领域，具体涉及一种改性的脱细胞角膜基质及其改性方法。背景技术[0002]角膜位于眼球前壁，是一种透明组织，主要行使屏障和屈光功能。由于角膜直接与外界接触，极易受到机械外伤、热灼伤、酸碱侵蚀等，从而引起角膜病的发生，严重者甚至失明。角膜移植是临床现有唯一的治疗方法，但受限于角膜捐赠供体数量的严重匮乏，很多角膜患者在等待中失去了希望。随着组织工程和再生医学的发展，体外构建与角膜功能类似的组织功能角膜代替物成为可能，有望解决角膜供体不足的问题。[0003]选取载体支架是成功构建组织工程角膜的关键。目前应用于组织工程角膜构建的载体支架材料主要包括天然材料和合成材料，其中天然材料主要包括羊膜、胶原、丝素蛋白、细胞外基质；合成材料主要包括聚羟基乙酸和聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物。哺乳动物中猪和人在解剖学上比较相似且来源广泛，因此对猪角膜进行各种脱细胞方法处理，获取可用于组织工程角膜的载体支架已越来