一种杆菌肽及其锌盐的制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105566458A(43)申请公布日2016.05.11(21)申请号201610097981.5(22)申请日2016.02.23(71)申请人华北制药集团新药研究开发有限责任公司地址050015河北省石家庄市长安区和平东路388号(72)发明人张炜冷凤耿文飞张雪霞任风芝(51)Int.Cl.C07K7/58(2006.01)C07K1/18(2006.01)C07K1/14(2006.01)权利要求书1页说明书4页(54)发明名称一种杆菌肽及其锌盐的制备方法(57)摘要本发明公开了一种从杆菌肽发酵液中分离纯化杆菌肽以及制备其锌盐杆菌肽锌的方法。该方法首先将发酵液酸化、过滤，滤液经大孔阳离子交换树脂吸附、解吸，解吸液脱盐、脱色后经萃取、沉淀制备出高活性杆菌肽。萃取液反萃入水相与锌盐反应获得杆菌肽锌。整个工艺简单、易操作，最大限度的保留产品的活性；该工艺高效、低能耗、适合工艺化生产，杆菌肽收率达60%以上，所制备杆菌肽及锌盐均符合美国药典标准。CN105566458ACN105566458A权利要求书1/1页1.一种杆菌肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1）杆菌肽发酵液以水稀释、加入酸化剂调节pH值为3.0-4.0，过滤，得到杆菌肽滤液；2）将滤液调节PH为6.0-9.0，通过大孔强酸型阳离子交换树脂吸附，再以碱性解吸剂解吸，得杆菌肽解吸液；3）解吸液通过大孔阳离子交换树脂脱盐，再通过脱色树脂进行脱色，得到脱色液；4）将脱色液以有机溶剂萃取，得萃取液；5）向萃取液中加入沉淀剂沉淀，经过滤、干燥，得到杆菌肽。2.根据权利要求1所述的制备方法，其中步骤2）所述大孔强酸型阳离子交换树脂为D001、HD8树脂中的任意一种。3.根据权利要求1所述的制备方法，其中步骤2）所述碱性解吸剂为2%-4%的氨水溶液。4.根据权利要求1所述的制备方法，其中步骤3）所述大孔阳离子交换树脂为001X2、001X7、001X8中的一种。5.根据权利要求1所述的制备方法，其中步骤3）所述脱色树脂为D315、D304、D301中的任意一种。6.根据权利要求1所述的制备方法，其中步骤4）中所述有机溶剂为正丁醇、异丁醇、乙酸丁酯中的一种，萃取pH为6.0-8.0。7.根据权利要求1所述的制备方法，其中步骤5）所述沉淀剂为丙酮，用量为萃取液体积的5-8倍。8.一种由杆菌肽制备杆菌肽锌的制备方法，所述方法由权利要求1制得的萃取液加入水，加酸化剂调节pH为3.0-5.0，萃取得水相，水相调节pH为7.5-9.0，向水相中加入硫酸锌沉淀，经过滤、干燥制得。9.根据权利要求8所述的制备方法，其中加酸化剂调节pH为3.5-4.0，水相调节pH为8.0-8.5。10.根据权利要求1或7所述的制备方法，其中所述酸化剂为盐酸、草酸、醋酸、硫酸中任意一种。2CN105566458A说明书1/4页一种杆菌肽及其锌盐的制备方法技术领域[0001]本发明属于工业微生物技术领域，具体涉及一种杆菌肽及其锌盐杆菌肽锌的制备方法。背景技术[0002]杆菌肽（Bacitracin）最初是Johnson从患者伤口污染物中分离出的一株枯草芽孢杆菌，经培养得到的多肽类抗生素。可由枯草芽孢杆菌（bacillussabtilis）和地衣芽孢杆菌（Bacilluslicheniformis）产生。由于其对革兰氏阳性菌有较强的抗菌作用，与金属离子络合后稳定性增强，抗菌活性更高。该药局部应用刺激小，过敏反应少见，耐酶，细菌对其产生耐药性又较慢，获得耐药性菌株极为罕见。而且其活性不受脓液、痰液、血液、渗出液和坏死组织的影响，故迄今常作为局部抗感染药而广泛使用。[0003]杆菌肽是由12个氨基酸组成的多肽类抗生素，其中含有一个7个氨基酸构成的环肽。杆菌肽中含有杆菌肽A、B、C、D、E、F等多个组分，其中杆菌肽Ａ生物活性最强。[0004]美国药典对药用杆菌肽各组分含量有严格的规定；其中杆菌肽A（HPLC相对保留时间为1.0RT）含量不小于40%，杆菌肽B1、B2、B3、A（0.7RT，0.7RT，0.8RT，1.0RT）的峰面积之和不小于70%，杆菌肽B1（0.7RT）之前的峰面积之和不得大于20%，杆菌肽F（2.4RT）的峰面积不大于6%。[0005]杆菌肽为多组分产品，美国药典对各组分含量有严格的规定。国内产品由于达不到国外药典标准多为兽用制品，本产品的提取技术路线国内研究很少，郭淑琴、魏景新发表的《树脂吸附法提取杆菌肽的研究》（沈阳化工1985.03.02），使用离子交换法提纯杆菌肽，可得到纯度54U/mg的杆菌肽，天津大学化工学院研究生刘咏的论文《抗生素杆菌肽锌脱色提纯工艺研究》利用膜分离技术对杆菌肽锌盐进行纯化精制，最终可使产