银翘清热片指纹图谱的建立方法及其指纹图谱.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105842353A(43)申请公布日2016.08.10(21)申请号201610159119.2(22)申请日2016.03.18(71)申请人江苏康缘药业股份有限公司地址222047江苏省连云港市经济技术开发区江宁工业城(72)发明人萧伟王伟付娟徐凤莲秦建平李家春黄文哲王振中(74)专利代理机构北京律和信知识产权代理事务所(普通合伙)11446代理人武玉琴刘国伟(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)权利要求书2页说明书20页附图11页(54)发明名称银翘清热片指纹图谱的建立方法及其指纹图谱(57)摘要本发明公开了银翘清热片指纹图谱的建立方法及其指纹图谱。银翘清热片指纹图谱的建立方法包括以下步骤：步骤1，制备银翘清热片供试品溶液；步骤2，分别精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图；步骤3，将步骤2中获得的银翘清热片指纹图谱仪器导出，并导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统；选择不同批次银翘清热片的色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰；用平均值计算法生成银翘清热片的对照指纹图谱；计算各共有峰的相对保留时间、相对峰面积。用本发明所提供的方法所建立的银翘清热片指纹图谱，能有效地表征银翘清热片的质量，有利于全面监控药物的质量。本发明方法具有方法简便、稳定、精密度高、重现性好等优点。CN105842353ACN105842353A权利要求书1/2页1.一种银翘清热片指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，制备银翘清热片供试品溶液：提供不同批次的银翘清热片供试品，分别取一定重量银翘清热片供试品置于容器中，向容器中加入甲醇并进行超声处理，冷却，摇匀，过滤，取滤液即得供试品溶液；参照峰溶液为一定浓度的葛根素溶液；步骤2，分别精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图；步骤3，将步骤2中获得的银翘清热片指纹图谱仪器导出，并导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统；选择不同批次银翘清热片的色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰；用平均值计算法生成银翘清热片的对照指纹图谱；计算各共有峰的相对保留时间、相对峰面积。2.根据权利要求1所述的银翘清热片指纹图谱的建立方法，其特征在于，步骤1的具体过程为：取银翘清热片供试品0.1～0.5g置具塞锥形瓶中，加入体积百分比浓度为50％甲醇25ml，250W/40kHz超声处理20min。3.根据权利要求3所述的银翘清热片指纹图谱的建立方法，其特征在于，在步骤2中，分别精密吸取参照峰溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录85分钟的色谱图。4.根据权利要求1所述的银翘清热片指纹图谱的建立方法，其特征在于，在步骤2中，银翘清热片指纹图谱测定的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以体积百分比浓度为0.1％磷酸为流动相B进行梯度洗脱；流速为1.0ml/min；检测波长为230nm；柱温为25℃；理论板数按葛根素峰计算不低于5000；梯度洗脱的流程为：0～10分钟，5→10％流动相A，95→90％流动相B；10～15分钟，10→11％流动相A，90→89％流动相B；15～25分钟，11→13％流动相A，89→87％流动相B；25～50分钟，13→20％流动相A，87→80％流动相B；50～65分钟，20→32％流动相A，80→68％流动相B；65～80分钟，32→60％流动相A，68→40％流动相B；80～85分钟，60％流动相A，40％流动相B。5.根据权利要求4所述的银翘清热片指纹图谱的建立方法，其特征在于，色谱柱规格为：KromasilC18，250mm×4.6mm，5μm。6.根据权利要求1所述的银翘清热片指纹图谱的建立方法，其特征在于，步骤1的具体过程为：取银翘清热片供试品0.1～0.5g置具塞锥形瓶中，加入体积百分比浓度为50％甲醇25ml，250W/40kHz超声处理20min；在步骤2中，分别精密吸取参照峰溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录85分钟的色谱图；银翘清热片指纹图谱测定的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以体积百分比浓度为0.1％磷酸为流动相B进行梯度洗脱；流速为1.0ml/min；检测波长为230nm；柱温为25℃；理论板数按葛根素峰计算不低于5000；梯度洗脱的流程为：0～10分钟，5→10％流动相A，95→90％流动相B；10～15分钟，10→11％流动相A，90→89％流动相B；15～25分钟，11→13％流动相A，89→87％流动相B；25～50分钟，13→20％流动相A，87→80％流动相B；50～65分钟，20→32％流动相A，80→68％流动相B；65～80分钟，32→60％流动相A，68→40％流动相