一种基于阴离子交换树脂纯化乌司他丁的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105837685A(43)申请公布日2016.08.10(21)申请号201610323339.4(22)申请日2016.05.13(71)申请人广东天普生化医药股份有限公司地址510520广东省广州市天河区天河高唐科技产业园高普路89号(72)发明人王旭郑少亮田友军肖益热(74)专利代理机构北京精金石专利代理事务所(普通合伙)11470代理人刘晔(51)Int.Cl.C07K14/81(2006.01)C07K1/36(2006.01)C07K1/34(2006.01)C07K1/30(2006.01)C07K1/18(2006.01)权利要求书2页说明书5页(54)发明名称一种基于阴离子交换树脂纯化乌司他丁的方法(57)摘要本发明属于医药技术领域，具体涉及一种基于阴离子交换树脂纯化乌司他丁的方法。该方法先用壳聚糖和甲壳素的混合物吸附分离得到乌司他丁粗品，然后将粗品与海藻酸盐混合后依次进行超滤、阴离子交接树脂纯化、超滤，最后将超滤后得到的截留液冷冻干燥，得到乌司他丁纯品。由本申请提供的基于阴离子交换树脂纯化乌司他丁的方法，缩短了纯化工艺，乌司他丁的收率和纯度高，其中，乌司他丁的收率达到87％；比活力达到4900IU/mg蛋白。CN105837685ACN105837685A权利要求书1/2页1.一种基于阴离子交换树脂纯化乌司他丁的方法，其具体步骤如下：1)取澄清尿液，调节pH至6-6.5，加入硅胶，搅拌，过滤，得滤液，调节滤液pH至3-5，继续向滤液中加入壳聚糖-甲壳素混合物，搅拌至吸附完全，依次用氨水洗脱、硫酸铵盐析，静置、沉淀、干燥后即得乌司他丁粗品；2)向乌司他丁粗品中加入pH＝5-5.5的醋酸钠-醋酸缓冲溶液至完全溶解，向溶液中加入海藻酸盐，搅拌，静置，离心，得下层沉淀物1，向沉淀物1中加入硫酸铵缓冲溶液使pH至6-6.5，超滤，得截留液1；3)调节截留液1的pH至6-6.5，将其上阴离子交换树脂，然后用pH＝6-6.5的磷酸盐缓冲液和0.8-2mol/LNaCl的混合溶液进行洗脱，得洗脱液1；4)将洗脱液1超滤，得截留液2；5)将截留液2冷冻干燥，即得纯乌司他丁。2.根据权利要求1所述的方法，其中，该方法具体步骤如下：1)取澄清尿液，调节pH至6-6.5，以每t尿液加入8-12kg硅胶的比例加入硅胶，搅拌，过滤，得滤液，调节滤液pH至3-5，继续向滤液中以每t尿液加入8-12kg壳聚糖-甲壳素混合物的比例加入壳聚糖-甲壳素混合物，搅拌至吸附完全，依次用氨水洗脱、硫酸铵盐析，静置、沉淀、干燥后即得乌司他丁粗品；2)向乌司他丁粗品中加入pH＝5-5.5的醋酸钠-醋酸缓冲溶液至完全溶解，继续向溶液中以乌司他丁粗品∶海藻酸盐＝1∶(0.01-0.03)的比例加入海藻酸盐，搅拌，离心，得下层沉淀物1，向沉淀物1中加入硫酸铵缓冲溶液使pH至6-6.5，超滤，得截留液1；超滤条件为：压力为0.2-0.6MPa、温度为4-30℃、截留分子量为5×104-7×104；3)调节截留液1的pH至6-6.5，将其以80-120mL/min的速度通过阴离子交换树脂，然后用pH＝6-6.5的磷酸盐缓冲液和0.8-2mol/LNaCl的混合溶液进行洗脱，得洗脱液1；4)将洗脱液1在压力为0.1-0.5MPa、温度为4-30℃、截留分子量为3×104的条件下超滤，得截留液2；5)将截留液2冷冻干燥，即得纯乌司他丁。3.根据权利要求1或2所述的方法，超滤所用的超滤膜为聚醚砜膜、聚丙烯膜、再生纤维素膜、醋酸纤维素膜、聚砜膜和聚偏氟乙烯膜中的一种或至少两种的复合膜；所述超滤膜的结构为中空纤维式、平板式、管式和卷式中的一种。4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述超滤膜为聚醚砜膜和醋酸纤维素膜的复合膜；所述超滤膜的结构为内压式中空纤维超滤膜。5.根据权利要求1或2所述的方法，其中，步骤1)中所述的壳聚糖与甲壳素的质量比为(3-8)∶1，所述壳聚糖的脱乙酰度大于95％，分子量为8-15万；步骤2)中所述的海藻酸盐为海藻酸钠或海藻酸钾，分子量为2-5万。6.根据权利要求1或2所述的方法，其中，步骤3)中所述的磷酸盐缓冲液为磷酸氢二钠或磷酸氢二钾缓冲液；步骤3)中所述的阴离子交换树脂为强碱性阴离子交换树脂与弱碱性阴离子交换树脂的混合物。7.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述的强碱性阴离子交换树脂为AmberliteIRA400、AmberliteIRA402、AmberliteIRA900和AmberliteIRA910中的至少一种；2CN105837685A权利要求书2/2页所述的弱碱性阴离子交换树脂为AmberliteIRA93、AmberliteIRA94、Amberl