一种基于阳离子交换树脂纯化乌司他丁的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107936114A(43)申请公布日2018.04.20(21)申请号201711093759.9(22)申请日2017.11.08(71)申请人广东天普生化医药股份有限公司地址510520广东省广州市天河区天河高唐科技产业园高普路89号(72)发明人郑少亮王旭肖益热(74)专利代理机构北京精金石专利代理事务所(普通合伙)11470代理人刘晔(51)Int.Cl.C07K14/81(2006.01)C07K1/18(2006.01)权利要求书1页说明书4页(54)发明名称一种基于阳离子交换树脂纯化乌司他丁的方法(57)摘要本发明公开了一种基于阳离子交换树脂纯化乌司他丁的方法，具体步骤如下：S1：称取1L的新鲜尿液放到烧杯中，往烧杯中加入12-18g甲质素搅拌80min后，用pH计测试搅拌后尿液的酸碱度，使得搅拌后尿液的酸碱度控制在pH6.2-7.3之间，接着用超滤膜对酸碱度在pH6.2-7.3之间的尿液进行过滤截流，得到预处理尿液。S2：把S1中制备的尿液从离子交换柱的上端依次加入，控制离子交换柱的交换流速在0.001-0.005m/s范围内，在离子交换柱的下端用烧杯接着交换后的乌司他丁，备用。S3：把S2中制备的乌司他丁，放置在真空干燥炉中以60℃干燥6-9h，最后，放入冷冻机进行冷冻1-2h，得到纯的乌司他丁样品。本发明纯化方法操作简单方便，化后的乌司他丁纯度高达99.75％以上，比活力至少为4880U/mg蛋白，收率达到78.5％以上。CN107936114ACN107936114A权利要求书1/1页1.一种基于阳离子交换树脂纯化乌司他丁的方法，其特征在于，具体步骤如下：S1：称取1L的的新鲜尿液放到烧杯中，往烧杯中加入12-18g甲质素搅拌80min后，用pH计测试搅拌后尿液的酸碱度，使得搅拌后尿液的酸碱度控制在pH6.2-7.3之间，接着用超滤膜对酸碱度在pH6.2-7.3之间的尿液进行过滤截流，得到预处理尿液。S2：把S1中制备的尿液从离子交换柱的上端依次加入，控制离子交换柱的交换流速在0.001-0.005m/s范围内，在离子交换柱的下端用烧杯接着交换后的乌司他丁，备用。S3：把S2中制备的乌司他丁，放置在真空干燥炉中以60℃干燥6-9h，最后，放入冷冻机进行冷冻1-2h，得到纯的乌司他丁样品。2.根据权利要求1所述的一种基于阳离子交换树脂纯化乌司他丁的方法，其特征在于，所述离子交换柱的内部填充有732型阳离子交换树脂，使用前，先把732型阳离子交换树脂放在稀盐酸中浸泡24～48小时后备用。3.根据权利要求1或2所述的一种基于阳离子交换树脂纯化乌司他丁的方法，其特征在于，所述离子交换树脂的吸附方式采用静态吸附方式或动态吸附方式。4.根据权利要求1或2所述的一种基于阳离子交换树脂纯化乌司他丁的方法，其特征在于，所述步骤S2的离子交换过程在避光、无菌的条件下进行。5.根据权利要求1所述的一种基于阳离子交换树脂纯化乌司他丁的方法，其特征在于，所述超滤膜采用无机超滤膜，孔径大小为0.5～10.0μm。6.根据权利要求1所述的一种基于阳离子交换树脂纯化乌司他丁的方法，其特征在于，所述离子交换柱的直径范围在40-60mm，长度范围为0.6-1.0m，承受的压力≤0.2MPa。7.根据权利要求1所述的一种基于阳离子交换树脂纯化乌司他丁的方法，其特征在于，所述步骤S3中的冷冻温度为-15～-3℃。2CN107936114A说明书1/4页一种基于阳离子交换树脂纯化乌司他丁的方法技术领域[0001]本发明涉及生物技术领域，具体为一种基于阳离子交换树脂纯化乌司他丁的方法。背景技术[0002]乌司他丁(Ulinastatin)系从健康成年男性新鲜尿液中分离纯化出来的一种酸性糖蛋白，是一种广谱的蛋白酶抑制剂，主要在肝脏中合成，由肾脏代谢随尿液排出，且其分解形成的低分子量成分也具有很强的抑制水解酶的作用。乌司他丁由143个氨基酸组成，相对分子质量约37000～43000，属于蛋白酶抑制剂，对胰蛋白酶、α-糜蛋白酶等丝氨酸蛋白酶及粒细胞弹性蛋白酶、透明质酸酶、巯基酶、纤溶酶等多种酶有抑制作用，还具有稳定溶酶体膜、抑制溶酶体酶的释放、抑制心肌抑制因子(MDF)产生、清除氧自由基及抑制炎症介质释放的作用。乌司他丁还可改善手术刺激引起的免疫功能下降、蛋白代谢异常。[0003]中国专利号：201210597955.0，申请日为2012.12.30公开的一种吸附柱层析纯化乌司他丁的方法，就是以健康成年男性新鲜尿液为原料，经过甲壳质吸附、氨水洗脱、硫酸铵盐析以及吸附柱层析等现代蛋白质高端生化分离技术来制备高纯度的乌司他丁，可以将总收率提高到60％以上，总效价不低于4000iu