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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105861608A(43)申请公布日2016.08.17(21)申请号201610373189.8(22)申请日2016.05.30(71)申请人深圳凯联龟业有限公司地址518000广东省深圳市南山区南新路海德大厦A座8楼805申请人深圳前海优百和生物健康研究院有限公司(72)发明人单凯李玉德薛智军(74)专利代理机构广州华进联合专利商标代理有限公司44224代理人吴平(51)Int.Cl.C12P21/06(2006.01)权利要求书1页说明书7页附图5页(54)发明名称一种制备龟蛋白多肽的方法(57)摘要本发明公开了一种龟板中蛋白多肽制备方法及应用。本发明具体步骤包括:龟板粉碎过50目筛,将脱钙剂溶液与所述龟细粉混合并充分反应,接着加入NaOH溶液,充分反应后得到反应液;将反应液离心后保留沉淀,所述沉淀清洗干净后得到脱钙后的龟细粉;将双蒸水与脱钙后的龟细粉混合,沸煮后得到龟蛋白溶出液;以及向龟蛋白溶出液中加入蛋白酶,充分反应后得到龟蛋白多肽该方法省时省力,能够简单、快速、高效地进行工业化生产,经过中试试验,其工艺参数可过渡到产业化。CN105861608ACN105861608A权利要求书1/1页1.一种龟蛋白多肽的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:取干燥龟板粉碎后过筛得到龟细粉;按照固液比为1:2~1:10将脱钙剂溶液与所述龟细粉混合并充分反应,接着加入NaOH溶液,充分反应后得到反应液;将所述反应液离心后保留沉淀,所述沉淀清洗干净后得到脱钙后的龟细粉;按照固液比为1:5~1:20将双蒸水与所述脱钙后的龟细粉混合,沸煮1h~6h后得到龟蛋白溶出液;以及按照5000U~30000U的酶量向所述龟蛋白溶出液中加入蛋白酶,充分反应后得到龟蛋白多肽。2.根据权利要求1所述的制备龟蛋白多肽的方法,其特征在于,所述脱钙剂为HCl或EDTA。3.根据权利要求2所述的制备龟蛋白多肽的方法,其特征在于,所述脱钙剂为EDTA,所述EDTA的浓度为0.1~0.75mol/L。4.根据权利要求1所述的制备龟蛋白多肽的方法,其特征在于,所述脱钙剂溶液与所述龟细粉混合后进行振摇,使其充分反应,振摇时间为1~6H。5.根据权利要求4所述的龟蛋白多肽的制备方法,其特征在于,在所述脱钙剂溶液与所述龟细粉充分反应后加入NaOH进行振摇,使其充分反应,,所述NaOH的浓度为1mol/L,振摇时间为6~24H。6.根据权利要求1所述的龟蛋白多肽的制备方法,其特征在于,所述将反应液离心所使用的转速是12000rpm。7.根据权利要求1所述的龟蛋白多肽的制备方法,其特征在于,所述将沉淀清洗干净后得到脱钙后的龟细粉的方法是使用去离子水清洗沉淀2次。8.根据权利要求1所述的龟蛋白多肽的制备方法,其特征在于,所述脱钙后的龟细粉按照固液比1:15加入去离子水,沸煮6个小时。9.根据权利要求1所述的龟蛋白多肽的制备方法,其特征在于,所述蛋白酶为胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶中的一种。10.根据权利要求6所述的龟蛋白多肽的制备方法,其特征在于,所述蛋白酶为中性蛋白酶,酶量为10000~30000U,酶解时间为6~24h。2CN105861608A说明书1/7页一种制备龟蛋白多肽的方法技术领域[0001]本发明涉及生物技术领域,尤其涉及一种制备龟蛋白多肽的方法。背景技术[0002]龟板,即龟甲,为龟科动物乌龟的背甲和腹甲,具有益肾健骨、滋阴潜阳、固精止血、补血养心等功效,为常用名贵滋补药材之一。古代名方如补肾丸、全鹿大补丸、定坤丸等中成药均含有龟甲,而且是粉碎成细粉入药。从战国时代的《山海经》到《神龙本草经》到《草本纲目》再到现代的《药典》均记载了龟的食用和药用功效。龟甲富含多种氨基酸、蛋白质、钙及多种有益微量元素,因此也常用于功能食品及药膳中。[0003]生物活性多肽是指能够调节生物机体的生命活动或具有某些生理活性作用(如激素作用、免疫调节、抗氧化、抗肿瘤等)的一类小分子活性多肽的总称,这些物质广泛存在于动物、植物及微生物中。因此,生物活性多肽是筛选药物、制备疫苗和食品添加剂的天然资源宝库。[0004]生物活性肽的结构可以从简单的二肽到较大分子的多肽。由2到10个氨基酸通过肽键形成的直链肽称为寡肽或小肽;由肽键结合起来的多于10个氨基酸的聚合体则称为多肽。近年来,科学家经研究发现,蛋白质经消化道酶促水解后主要以小肽或多肽的形式在肠道中的吸收率高于蛋白质和氨基酸,且多肽具有促进脂质代谢、降低胆固醇、促进矿物质吸收和促进机体免疫等生理功能,具有较好的酸、热稳定性和水溶性和良好的生理活性。因此,采用酶解技术将龟甲蛋白水解成多肽,可有效提高龟甲蛋白质的利用率,增加龟甲产品的附加值