一种具有聚集诱导发光特性的羧化壳聚糖纳米荧光探针及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106243244A(43)申请公布日2016.12.21(21)申请号201610632880.3(22)申请日2016.08.04(71)申请人浙江大学地址310027浙江省杭州市西湖区浙大路38号(72)发明人王征科刘亚蓝胡巧玲唐本忠(74)专利代理机构杭州求是专利事务所有限公司33200代理人万尾甜韩介梅(51)Int.Cl.C08B37/08(2006.01)C09K11/06(2006.01)G01N21/64(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图1页(54)发明名称一种具有聚集诱导发光特性的羧化壳聚糖纳米荧光探针及其制备方法(57)摘要本发明公开的一种具有聚集诱导发光特性的羧化壳聚糖纳米荧光探针，其制备方法主要步骤包括：将四苯基乙烯荧光分子(TPE)标记到羧化壳聚糖链(NCS)上得到具有聚集诱导发光(AIE)特性的TPE-NCS；利用多聚磷酸钠通过离子交联法制得TPE-NCS纳米粒子。本发明制得的纳米荧光探针在水溶液中具有良好的分散性，且具有聚集诱导发光特性，与传统荧光探针相比，具有灵敏度高、光稳定性好、荧光光谱不漂移、纳米粒子尺寸稳定均一、易储存等优点。此外，由于羧化壳聚糖固有特性，该探针具有良好的生物相容性，体内循环长滞留性以及广泛pH范围内良好的分散性，有望用于长周期细胞示踪、病理监测、药物代谢检测等领域。CN106243244ACN106243244A权利要求书1/1页1.一种具有聚集诱导发光特性的羧化壳聚糖纳米荧光探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)将粘均分子量为1万-100万、乙酰度5％-20％、羧化度20％-60％的羧化壳聚糖分散于DMSO中，在50-65℃下溶胀12-48h，再向该溶液中加入TPEITC，TPEITC与壳聚糖中氨基的摩尔比为1％-20％，反应24-48h，获得溶液A；2)向溶液A中加入四氢呋喃，四氢呋喃与溶液A的体积比为10，搅拌均匀后静置至溶液分层，去除上清液，离心，所得沉淀物用无水乙醇超声分散20min，离心，将沉淀用三蒸水溶解，得到溶液B；3)将溶液B装入截留分子量为3500的透析袋中并置于三蒸水中透析4-5天，冻干，获得荧光标记的羧化壳聚糖；4)将步骤3)的荧光标记羧化壳聚糖溶于体积分数为1％的醋酸溶液中，得到荧光标记羧化壳聚糖溶液C；5)配制质量分数为1-40％的多聚磷酸钠溶液，将多聚磷酸钠溶液以溶质质量比为1：5的比例滴加入溶液C，剧烈搅拌0.5-1h，离心，去除上清液，加入三蒸水，获得具有聚集诱导发光特性的羧化壳聚糖纳米荧光探针。2.一种具有聚集诱导发光特性的羧化壳聚糖纳米荧光探针，其特征在于，由权利要求1所述的方法制备而成。2CN106243244A说明书1/4页一种具有聚集诱导发光特性的羧化壳聚糖纳米荧光探针及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及一种具有聚集诱导发光特性的羧化壳聚糖纳米荧光探针及其制备方法。背景技术[0002]荧光探针是以荧光物质作为指示剂，并在一定波长光的激发下使指示剂产生荧光，通过检测所产生的荧光实现对被检测物质的定性或者定量分析。当前，荧光探针主要应用于生物、医学和环境监测等领域，针对不同的需求，相应的探针已被大量的探究，总体来说，可以分为三类：传统的荧光探针、无机量子点探针、新型的荧光探针。其中，传统的荧光探针有光不稳定性、光漂白以及聚集诱导淬灭效应等缺陷，而无机量子点探针因其含有重金属而具有不可忽视的细胞毒性问题，因此新型荧光探针脱颖而出。而具有聚集诱导发光(AIE)特性的探针因其卓越的荧光性能备受关注。羧化壳聚糖(NCS)是壳聚糖部分糖环被羧化后的产物，具有优异的生物相容性、生物活性、无毒性、体内循环长滞留性、广泛pH范围内可水溶等性能，在生物医学领域备受青睐。因此，考虑到现在生物医学研究中对细胞长周期示踪(如研究癌症的发展、诊断、治疗；免疫反应以及转移后的干细胞基因完整性、增值、分化等)以及广泛pH范围内使用(如癌症患者细胞外pHe介于5.7至7.8之间)的荧光探针的迫切需求，制备一种广泛pH范围内可水溶且具有长周期细胞示踪性能的荧光探针具有重要的科学意义和良好的应用前景。发明内容[0003]本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种广泛pH范围内可水溶且具有长周期细胞示踪性能的具有聚集诱导发光特性的羧化壳聚糖纳米荧光探针及其制备方法。[0004]本发明的具有聚集诱导发光特性的羧化壳聚糖纳米荧光探针的制备方法，包括如下步骤：[0005]1)将粘均分子量为1万-100万、乙酰度5％-20％、羧化度20％-60％的羧化壳聚糖分散于DMSO中，在50-65℃下溶胀12-48h，再向该溶液中加入含异硫氰酸酯官能团的TPE分子(TPEITC)，