菱壳中抗氧化活性物质的优化提取及抗氧化验证方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106420858A(43)申请公布日2017.02.22(21)申请号201611048268.8(22)申请日2016.11.21(71)申请人嘉兴职业技术学院地址314036浙江省嘉兴市桐乡大道547号(72)发明人申丽静张建群曹巧巧(74)专利代理机构嘉兴永航专利代理事务所(普通合伙)33265代理人蔡鼎(51)Int.Cl.A61K36/185(2006.01)A61P39/06(2006.01)G01N21/33(2006.01)权利要求书2页说明书4页附图1页(54)发明名称菱壳中抗氧化活性物质的优化提取及抗氧化验证方法(57)摘要本发明提供了一种菱壳中抗氧化活性物质的优化提取及抗氧化验证方法。本发明包括：A、优化提取方法：1)、南湖无角菱去肉留壳；2)、菱壳烘干；3)、菱壳粉碎、过筛；4)、菱壳粉末加入提取剂，混匀；5)、菱壳溶液进行超声提取；6)、过滤取得提取液；B、抗氧化验证方法：1)、提取液稀释操作；2)、测定提取液对DPPH自由基的清除能力。本发明配合超声波辅助提取，达到最佳提取效果，进一步有效验证抗氧化效果。经过试验表明南湖菱壳中抗氧化活性物质的超声辅助最佳提取条件为超声时间30min、乙醇浓度60％、料液比1:60、提取温度60℃，在此条件下DPPH自由基清除率达到85.6％。CN106420858ACN106420858A权利要求书1/2页1.菱壳中抗氧化活性物质的优化提取及抗氧化验证方法，其特征在于，包括以下操作步骤：A、优化提取方法：1)、称取适量的南湖无角菱进行去肉留壳操作；2)、将菱壳置于清水中洗净，而后放置于电热恒温鼓风干燥箱中，开启电热恒温鼓风干燥箱且设置于60℃进行持续烘干作业，经过一段时间直至菱壳达到恒重，取出菱壳；3)、将烘干后的菱壳放置入高速多功能粉碎机进行粉碎操作，菱壳粉碎后取出过60目筛网得南湖无角菱的菱壳粉末；4)、用电子天平准确称取一定量的菱壳粉末放入容器中，用移液管将作为提取剂的乙醇溶液加入称取的菱壳粉末中，进一步通过搅拌使菱壳粉末与乙醇溶液混匀；5)、将菱壳溶液放置于超声仪中，调节超声仪上的温度旋钮设定温度，调节超声仪上的时间旋钮设定超声时间，开启超声仪发出超声波对菱壳溶液进行抗氧化活性物质的提取，由此经过一段时间的提取作业；6)、提取完毕后将菱壳溶液取出，经过滤纸过滤得到含有抗氧化活性物质的提取液；B、抗氧化验证方法：1)、用移液管将1mL提取液移入100mL容量瓶中，加入提取所用溶剂至刻度线，摇匀进行稀释操作；2)、设置三组实验样本：第一组：在8.00mL0.1mmol/LDPPH自由基溶液中加入0.40mL已稀释过的菱壳提取液，搅拌混匀，放置暗处30min后，将溶液倒入比色皿中，置于分光光度计中，设定波长为517nm，以蒸馏水为空白溶液，调零，测定吸光度值，所得数值记为A1；第二组：在8.00mL0.1mmol/LDPPH自由基溶液中加入0.40mL乙醇溶液，搅拌混匀，放置暗处30min后，将溶液倒入比色皿中，置于分光光度计中，设定波长为517nm，以蒸馏水为空白溶液，调零，测定吸光度值，所得数值记为A0；第三组:在8.00mL70％的乙醇溶液中加入0.40mL已稀释过的菱壳提取液，搅拌混匀，放置暗处30min后，将溶液倒入比色皿中，置于分光光度计中，设定波长为517nm，以蒸馏水为空白溶液，调零，测定吸光度值，所得数值记为A2；通过公式I％＝[1-(A1-A2)/A0]×100％，计算DPPH自由基清除率I。2.根据权利要求1所述的菱壳中抗氧化活性物质的优化提取及抗氧化验证方法，其特征在于，单因素试验提取工艺的优化方案为：准确称取菱壳粉末0.5000g，乙醇溶液的浓度为40％～60％，菱壳粉末的质量和乙醇溶液的体积比为1：40～1：60；在提取过程中超声仪的设定温度为40℃～60℃，设定超声时间为20min～40min。3.根据权利要求1所述的菱壳中抗氧化活性物质的优化提取及抗氧化验证方法，其特征在于，正交试验提取工艺的最佳方案为：乙醇溶液的浓度为60％，菱壳粉末的质量和乙醇溶液的体积比为1：60；在提取过程中超声仪的设定温度为60℃，设定超声时间为30min。4.根据权利要求1所述的菱壳中抗氧化活性物质的优化提取及抗氧化验证方法，其特征在于，步骤B的2)中，DPPH自由基溶液的制备方法为：准确称取DPPH自由基试剂19.7mg，用70％乙醇溶液溶解并定容至500mL，摇匀，得0.1mmol/LDPPH自由基溶液，置于4℃冰箱中冷藏备用。2CN106420858A权利要求书2/2页5.根据权利要求1所述的菱壳中抗氧化活性物质的优化提取及抗氧化验证方法，其特征在于，步骤A的2)中，电