骨组织RNA快速提取试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106434633A(43)申请公布日2017.02.22(21)申请号201610938574.2(22)申请日2016.10.25(71)申请人山东艾莱普生物科技有限公司地址250000山东省济南市高新区颖秀路2766号428室(72)发明人张茂(74)专利代理机构青岛高晓专利事务所37104代理人黄晓敏(51)Int.Cl.C12N15/10(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图1页(54)发明名称骨组织RNA快速提取试剂盒(57)摘要本发明公开了一种骨组织RNA快速提取试剂盒，包括至少一个基因组DNA清除柱、至少一个RNA吸附柱以及与基因组DNA清除柱配合使用的裂解液和与RNA吸附柱配合使用的洗脱液。本发明的有益效果是：试剂盒采用独有的不含苯酚/氯仿配方的裂解液，并添加多种成分去除骨组织蛋白多糖。采用独特的缓冲体系和双硅胶柱纯化系统解决DNA残留问题，能够得到纯度高，完整性好的骨组织RNA。独特基因组DNA清除柱技术可以有效清除基因组DNA（gDNA）残留，得到的RNA不需要DNA酶消化，可用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验，单个样品操作一般可在35分钟内完成，避免提取时间过长，RNA酶污染等原因造成RNA降解。CN106434633ACN106434633A权利要求书1/1页1.骨组织RNA快速提取试剂盒，其特征在于：包括至少一个基因组DNA清除柱、至少一个RNA吸附柱以及与基因组DNA清除柱配合使用的裂解液和与RNA吸附柱配合使用的洗脱液。2.根据权利要求1所述的骨组织RNA快速提取试剂盒，其特征在于：所述裂解液包括裂解液RLTPlus和裂解液CLB，所述洗脱液为无核糖核酸酶水。3.根据权利要求2所述的骨组织RNA快速提取试剂盒，其特征在于：所述裂解液RLTPlus中含有浓度为2-5mol/L的异硫氰酸胍、PH为6.0-8.5的Tris-HCl缓冲溶液、1.5-3.0g/L的十二烷基硫酸钠；所述裂解液CLB中含有浓度为2-5mol/L的异硫氰酸胍、2-2.5g/L的十六烷基三甲基溴化铵、PH为6.0-8.5的Tris-HCl缓冲溶液、2-10g/L的聚乙烯吡咯烷酮、浓度为10-100mmol/L的氯化钠。4.根据权利要求1所述的骨组织RNA快速提取试剂盒，其特征在于：还包括漂洗液RW、助提剂PLANTaid、去蛋白液RW1。5.根据权利要求4所述的骨组织RNA快速提取试剂盒，其特征在于：所述漂洗液RW中含有PH为6.0-8.5、浓度为5-50mol/L的Tris-HCl缓冲溶液、浓度为10-100mmol/L氯化钠。6.根据权利要求4所述的骨组织RNA快速提取试剂盒，其特征在于：所述助提剂PLANTaid中含有0.5-1.0mmol/L的二硫苏糖醇、0.5-2.0%的吐温-20、3-15%的聚乙烯吡咯烷酮。7.根据权利要求4所述的骨组织RNA快速提取试剂盒，其特征在于：去蛋白液RW1中含有2-5mol/L的异硫氰酸胍、体积分数60-80%的乙醇。8.根据权利要求1所述的骨组织RNA快速提取试剂盒，其特征在于：所述基因组DNA清除柱和RNA吸附柱为硅膜吸附柱。9.根据权利要求1所述的骨组织RNA快速提取试剂盒，其特征在于：至少包括如下两个个步骤：A步骤，用基因组DNA清除柱将基因组DNA清除；B步骤，用RNA吸附柱将RNA吸附。10.根据权利要求9所述的骨组织RNA快速提取试剂盒，其特征在于：包括如下步骤：（1）利用裂解液CLB对样品进行裂解得到裂解物；（2）将裂解物转入离心管，离心，收集上清液，向上清液中加入其体积0.5倍无水乙醇，混匀；（3）A步骤，用基因组DNA清除柱将基因组DNA清除：将上清液加入到放置于收集管内的基因组DNA清除柱上，离心弃掉废液，将基因组DNA清除柱置于离心管内，加入裂解液RLTPlus，离心收集滤液；（4）向步骤（3）得到的滤液中加入其体积0.5倍的无水乙醇混匀；（5）B步骤，用RNA吸附柱将RNA吸附：将步骤（4）得到的混合物加入一个RNA吸附柱中，离心，弃掉滤液；（6）向RNA吸附柱中加入去蛋白液RW1，离心，弃掉废液；（7）向RNA吸附柱中加入漂洗液RW，离心，弃掉废液，重复一遍；（8）用无水核糖核酸水洗脱得到RNA洗脱液。2CN106434633A说明书1/5页骨组织RNA快速提取试剂盒技术领域[0001]本发明涉及RNA提取，涉及核酸纯化领域，具体地说就是骨组织RNA快速提取试剂盒。背景技术[0002]分子生物学的研究主要集中在核酸和蛋白质，绝大部分的分子生物学研究都需要首先得到纯化的核酸，因此核酸纯化是分子生物学的基石之一，全球市场非常庞大，世界各国都在正在不断改进提取纯化方法，以达到更