一种快速提取石蜡组织RNA的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110819622A(43)申请公布日2020.02.21(21)申请号201910953885.X(22)申请日2019.10.09(71)申请人广州达正生物科技有限公司地址510725广东省广州市黄埔区护林路1199号4栋403室(72)发明人杨俊范明胶何靖李勐黎(74)专利代理机构广州科粤专利商标代理有限公司44001代理人刘明星朱聪聪(51)Int.Cl.C12N15/10(2006.01)C12Q1/6806(2018.01)权利要求书2页说明书6页(54)发明名称一种快速提取石蜡组织RNA的方法(57)摘要本发明公开了一种快速提取石蜡组织RNA的方法。A、脱蜡：将FFPE样品置于脱蜡混合液bufferAL中进行脱蜡；B、组织的裂解：将脱蜡后的样品用裂解液bufferRLT裂解，得裂解液；C、纯化：裂解液中加入纯化液1，混匀孵育，离心取上清，将上清转入新的管中，再加入氯仿混匀，离心取上清转入新的管中，得到纯化液；D、RNA分离：在纯化液中加入DNaseI工作混合液，混匀孵育，再加入纯化液2，混匀孵育，离心取上清至无RNase离心管中，得到RNA。本发明的方法脱蜡效率高且不会有试剂残留问题，1～3片肿瘤组织切片即可获得足够的RNA，所提取的RNA含量和纯度高，操作过程简便快捷，重复性高，且所需样本量少。CN110819622ACN110819622A权利要求书1/2页1.一种快速提取石蜡组织RNA的试剂盒，其特征在于，包括以下组分：脱蜡混合液bufferAL：0.5～1.5％的tween-20(V/V)、5～15mM的Tris·Cl；裂解液bufferRLT：400～600mM的Tris·Cl，15～25mM的EDTA，质量分数0.1～1％的SDS，80～120mM的DTT；DNaseI工作混合液：8～12mM的Tris·Cl、0.1Mm的CaCl2、8～12mM的MnCl2和DNaseI0.5～7.5U/μL；纯化液1：1～5％Chelex-100(m/v，g/ml)，溶剂为TE缓冲液；纯化液2：4～7％Chelex-100(m/v，g/ml)，溶剂为DEPC处理水；蛋白酶K。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的脱蜡混合液bufferAL包含体积分数1％的tween-20，10mM的Tris·Cl。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的裂解液bufferRLT包含500mM的Tris·Cl，20mM的EDTA，质量分数0.5％的SDS，100mM的DTT。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的DNaseI工作混合液包含10mMTris·Cl，0.1MmCaCl2，10mMMnCl2、0.5U/μLDNaseI。5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的纯化液1包括5％g/ml的Chelex-100，溶剂为TE缓冲液。6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的纯化液2包括6％g/ml的Chelex-100，溶剂为DEPC水。7.一种快速提取石蜡组织RNA的方法，其特征在于，是利用权利要求1、2、3、4、5或6所述的试剂盒进行提取，具体方法如下：A、脱蜡：将FFPE样品置于脱蜡混合液bufferAL中进行脱蜡；B、组织的裂解：将脱蜡后的样品用裂解液bufferRLT和蛋白酶K裂解，得裂解液；C、纯化：裂解液中加入纯化液1，混匀孵育，离心取上清，将上清转入新的管中，再加入氯仿混匀，离心取上清转入新的管中，得到纯化液；D、RNA分离：在纯化液中加入DNaseI工作混合液，混匀孵育，再加入纯化液2，混匀孵育，离心取上清至无RNase离心管中，得到RNA。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，具体步骤如下：A、脱蜡：刮取1片10μm厚、面积约1×1cm2的FFPE样品至1.5mL离心管中，加入100μl脱蜡混合液bufferAL,将贴在管壁上的组织全部浸入其中，90℃孵育10min；B、组织的裂解(1)加入120μl裂解液bufferRLT，2μlProteinaseK使得其终浓度为10mg/L涡旋震荡混匀56℃孵育15min400rpm,直至样品完全溶解.80℃孵育15min，离心，使管壁上的溶液收集到管底；C、纯化(1)加入100μl纯化液1,轻轻混匀，99℃450rmp孵育10min,立即放在冰上静置2min,10500xg离心15min；(2)转移上清至新的EP管中金属浴加热至45℃后，加入100μl氯仿充分混匀后，10500xg2CN110819622A权利要求书2/2页离心15min,吸取上清180μl至新的EP管中；D、RNA分离(1)在步骤C的(2)的含有上清的新的EP管中加入2