RNA提取试剂盒及RNA提取方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113832145A(43)申请公布日2021.12.24(21)申请号202111318802.3(22)申请日2021.11.09(71)申请人苏州贝康医疗器械有限公司地址215000江苏省苏州市工业园区星湖街218号生物纳米园A3楼101单元(72)发明人杨祖许瑞霞杨玉妍王莹莹孔令印梁波(74)专利代理机构广州华进联合专利商标代理有限公司44224代理人李睿(51)Int.Cl.C12N15/10(2006.01)权利要求书2页说明书11页附图7页(54)发明名称RNA提取试剂盒及RNA提取方法(57)摘要本发明涉及一种RNA提取试剂盒及RNA提取方法。该RNA提取试剂盒包括变性裂解剂和蛋白分离剂，变性裂解剂包括异硫氰酸胍和β‑巯基乙醇，异硫氰酸胍的摩尔量和β‑巯基乙醇的体积之比为(1mol～6mol):(1mL～15mL)；蛋白分离剂包括辛酸。将异硫氰酸胍、β‑巯基乙醇与辛酸结合使用，则能够在不含苯酚和氯仿的条件下，提高RNA得率，减少GC含量低的RNA的丢失。CN113832145ACN113832145A权利要求书1/2页1.一种RNA提取试剂盒，其特征在于，包括变性裂解剂和蛋白分离剂，所述变性裂解剂包括异硫氰酸胍和β‑巯基乙醇，所述异硫氰酸胍的摩尔量和所述β‑巯基乙醇的体积之比为(1mol～6mol):(1mL～15mL)；所述蛋白分离剂包括辛酸。2.根据权利要求1所述的RNA提取试剂盒，其特征在于，所述异硫氰酸胍的摩尔量和所述β‑巯基乙醇的体积之比为(2mol～5mol):(7mL～13mL)。3.根据权利要求1所述的RNA提取试剂盒，其特征在于，所述变性裂解剂还包括第一缓冲液，所述第一缓冲液选自柠檬酸钠缓冲液及Tris‑EDTA缓冲液中的一种；及/或，所述蛋白分离剂还包括第二缓冲液，所述第二缓冲液选自乙酸钠缓冲液、氯化钠溶液及氯化铵溶液中的一种。4.根据权利要求3所述的RNA提取试剂盒，其特征在于，所述第一缓冲液包含柠檬酸钠，所述柠檬酸钠与所述异硫氰酸胍的摩尔量之比为(5mmol～30mmol):(1mol～6mol)；及/或，所述第二缓冲液包含乙酸钠，所述乙酸钠的摩尔量与所述辛酸的体积之比为(0.01mol～1mol):(2mL～25mL)。5.根据权利要求1～4任一项所述的RNA提取试剂盒，其特征在于，所述RNA提取试剂盒还包括沉淀剂，所述沉淀剂包括异丙醇、无水乙醇和糖原中的至少一种。6.根据权利要求5所述的RNA提取试剂盒，其特征在于，所述沉淀剂包括异丙醇、无水乙醇和糖原，所述异丙醇的体积、所述无水乙醇的体积和所述糖原的质量之比为(20μL～30μL):(5μL～7.5μL):(1μg～5μg)。7.根据权利要求1所述的RNA提取试剂盒，其特征在于，所述变性裂解剂还包括第一缓冲液，所述第一缓冲液包括柠檬酸钠，在所述变性裂解剂中，所述柠檬酸钠的浓度为5mmol/L～30mmol/L，所述异硫氰酸胍的浓度为1mol/L～6mol/L，所述β‑巯基乙醇的体积分数为0.1％～1.5％；所述蛋白分离剂还包括第二缓冲液，所述第二缓冲液包括乙酸钠，在所述蛋白分离剂中，所述乙酸钠的浓度为0.01mol/L～1mol/L，所述辛酸的体积分数为0.2％～2.5％；所述RNA提取试剂盒还包括沉淀剂，所述沉淀剂包括异丙醇、无水乙醇和糖原，所述异丙醇的体积、所述无水乙醇的体积和所述糖原的质量之比为(20μL～30μL):(5μL～7.5μL):(1μg～5μg)，在所述沉淀剂中，所述糖原的浓度为40μg/mL～200μg/mL。8.根据权利要求1～4和6～7中的任一项所述的RNA提取试剂盒，其特征在于，所述RNA提取试剂盒还包括乙醇胺溶液、蛋白酶K和丝氨酸蛋白酶抑制剂中的至少一种。9.一种RNA提取方法，其特征在于，包括以下步骤：将样本与变性裂解剂混合，得到第一混合液，所述变性裂解剂包括异硫氰酸胍和β‑巯基乙醇，所述异硫氰酸胍的摩尔量和所述β‑巯基乙醇的体积之比为(1mol～6mol):(1mL～15mL)；将所述第一混合液与蛋白分离剂混合，得到第二混合液，所述蛋白分离剂包括辛酸；及将第二混合液放置至少5min后进行固液分离，取液体，制备RNA。10.根据权利要求9所述的RNA提取方法，其特征在于，所述异硫氰酸胍的工作浓度为1mol/L～6mol/L，所述β‑巯基乙醇的工作浓度为0.1％(v/v)～1.5％(v/v)，所述辛酸的工作浓度为0.2％(v/v)～2.5％(v/v)。11.根据权利要求9所述的RNA提取方法，其特征在于，所述将第二混合液进行固液分2CN113832145A权利要求书2/2页离，取液体之后，还包括以下步骤：将所述液体与沉淀剂混合