一种采用高效液相色谱-质谱法测定乳粉中的牛磺酸含量的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109752465A(43)申请公布日2019.05.14(21)申请号201711053481.2(22)申请日2017.11.01(71)申请人江苏维赛科技生物发展有限公司地址212009江苏省镇江市丁卯新区国家科技园B11栋3楼(72)发明人杜霞洪霞张淑雅(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/06(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图1页(54)发明名称求。一种采用高效液相色谱-质谱法测定乳粉中的牛磺酸含量的方法(57)摘要本发明属于食品学检验领域。具体涉及乳粉中的牛磺酸含量的测定方法。该方法是将奶粉样品用水溶解，加乙酸锌沉淀蛋白，经离心、过0.45μm粒径的微孔膜过滤后，采用HPLC-Q/ORBITRAPMS进行分析检测。质谱采用正离子模式分析,同位素内标法定量。色谱测定条件为色谱柱：ZORBAXSB-AqC18(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：0.1％甲酸水溶液(A)和乙腈（B）流速0.60mL/min；进样量10μL；柱温箱温度25℃。采用梯度洗脱的分离模式。该方法在0.5~10μg/L范围内线性良好(r=0.9998)，检出限(limitofdetection,LOD)为0.2μg/kg。分别在样品中添加牛磺酸标准溶液2、5、10μg/kg水平上进行添加回收率实验,方法回收率在79.9%~94.4%范围内,相对标准偏差在4.7%~6.9%范围内(n=5)。该方法具有准确度高、简单、快速等特点，精密度、CN109752465A准确度和灵敏度均满足乳粉中牛磺酸的检测要CN109752465A权利要求书1/1页1.乳粉中的牛磺酸含量的测定方法，其特征在于将待测样品预处理后，用高效液相色谱-质谱法检测，包括以下步骤：（1）样品预处理称取5.00g(±0.05g)乳粉样品于50mL聚四氟乙烯塑料离心管中，加入35mL超纯水，涡旋5min；用移液枪准确加入2.50mL1.0mol/L乙酸锌溶液后定容至50mL，涡旋5min；于4℃,13000r/min离心5min；取上清液0.1mL过0.45μm膜于进样瓶中，再用移液枪准确加入50μL内标液及850μL超纯水于进样瓶，以备超高效液相色谱-串联质谱检测；（2）上机测定用高效液相色谱-质谱法检测，记录色谱图，内标峰高（Hi）与牛磺酸峰高（Hs），用标准曲线换算浓度；前述的牛磺酸含量的测定方法，其特征在于该方法色谱条件是是色谱柱:ZORBAXSB-AqC18(4.6mm×250mm,5μm)；流动相：0.1％甲酸水溶液(A)和乙腈(B)；流速0.60mL/min；进样量10μL；柱温箱温度25℃；采用梯度洗脱的分离模式；质谱条件是可加热的电喷雾离子源(HESI-Ⅱ)；采用正离子扫描模式；毛细管温度320℃，鞘气(N2)流速50L/min，辅助气(N2)流速8L/min，吹扫气(N2)流速5L/min；喷雾电压3kV，透镜电压50V；采用正离子目标化合物-二级质谱扫描模式；分辨率R=35000。2.本发明的有益效果是：本发明应用高效液相色谱-质谱法测定乳粉中的牛磺酸含量具有较好的准确度与精密度。2CN109752465A说明书1/4页一种采用高效液相色谱-质谱法测定乳粉中的牛磺酸含量的方法技术领域[0001]本发明属于食品学检验领域。具体涉及乳粉中的牛磺酸含量的测定方法。背景技术[0002]牛磺酸俗称牛胆碱、牛胆素,广泛分布于生物体内各组织、器官，主要以游离状态存在于组织间液和细胞内液中，化学名称为2-氨基乙基氨基酸，化学式C2H7NO3S，结构式H2N-CH2-CH2-SO3H，分子量为125.15。易溶于水，微溶于95%的乙醇，不溶于无水乙醇、醚及烃等有机溶剂。[0003]牛磺酸是一种必需的非蛋白质氨基酸,适量的牛磺酸可以促进人体激素分泌，改善人体各种生理功能。牛磺酸是中枢神经系统最丰富的游离氨基酸之一，且能抑制心肌细胞凋亡，对心血管系统以及中枢神经系统的完善与保护起着重要作用。牛磺酸的含量对机体的生理、病理和生物学变化具有一定的调控作用,甚至有研究表明血浆中的牛磺酸水平可能是心肌梗死的有用指标。由于牛磺酸对不同年龄阶层的人群均具有良好的保健作用，故通常作为添加剂应用于乳粉产品中。因此，精确测定乳粉中牛磺酸的含量,对均衡人体营养摄入,维持机体健康具有重要意义。[0004]目前常用的牛磺酸检测方法有氨基酸自动分析法、薄层扫描法、气相色谱法、柱前衍生化高效液相色谱法和柱后衍生化高效液相色谱法,高效液相色谱-串联质谱法以及高效液相色谱-蒸发光散射检测器法。其中薄层扫描法容易受氨基酸的干扰，灵敏度与准确度均低；氨基酸自动分析法分析样品种类和数量有限；高效液相