一种青霉素检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106645466A(43)申请公布日2017.05.10(21)申请号201611103357.8(22)申请日2016.12.05(71)申请人百奥森（江苏）食品安全科技有限公司地址214070江苏省无锡市滴翠路100号创意园三期A幢303(72)发明人杨敏周合张根义张进周朱晨胡彬吴念绮(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)权利要求书1页说明书5页(54)发明名称一种青霉素检测方法(57)摘要本发明公开了一种青霉素检测方法，包括如下步骤：配制细菌内毒素检测用分散液：取甘油、阴离子表面活性剂和非离子表面活性剂，溶于注射用水或细菌内毒素检查用水中，调pH至6～8，去内毒素，得分散液，其中，甘油浓度为0.1～2%（v/v），阴离子表面活性剂浓度为0.05～0.5%（w/v），非离子表面活性剂浓度为0.1～1%（v/v）。本发明灵敏度高，可满足我国对于青霉素在动物性组织中的最高残留限量的检测要求，可为青霉素菌渣资源化利用为饲料提供一定的技术依据。CN106645466ACN106645466A权利要求书1/1页1.一种青霉素检测方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）配制细菌内毒素检测用分散液：取甘油、阴离子表面活性剂和非离子表面活性剂，溶于注射用水或细菌内毒素检查用水中，调pH至6～8，去内毒素，得分散液，其中，甘油浓度为0.1～2%（v/v），阴离子表面活性剂浓度为0.05～0.5%（w/v），非离子表面活性剂浓度为0.1～1%（v/v）；（2）绘制标准曲线，拟合标准曲线方程：青霉素标准品溶解于溶剂中，并利用溶剂稀释配制成浓度在0.1μg·m～2000μg·mL-1之间不同梯度浓度的青霉素标准溶液，然后采用0.45μm针头过滤器过滤，利用高效液相色谱法进行检测，以色谱峰面积为纵坐标、以青霉素标准溶液浓度为横坐标将高效液相色谱法检测绘制成标准曲线，然后进行拟合，得到标准曲线方程：Y=kX+b，方程中Y表示色谱峰面积，X表示青霉素的浓度，k和b为常数；所述的溶剂由乙腈和水按乙腈与水的体积比为1:1混合而成；（3）提取：首先将青霉素菌渣加入提取液中，混合均匀后超声提取25min～35min，然后进行离心分离，离心分离得到的上清液即为青霉素粗提液，向青霉素粗提液中加入无水硫酸钠和正己烷，再次进行离心分离，离心分离后分三层，取中间层，即为青霉素提取液；所述的青霉素菌渣的质量与提取液的体积比为1g:(3mL～5mL)；所述的提取液由乙腈和质量分数为0.3%的甲酸水溶液按乙腈与质量分数为0.3%的甲酸水溶液的体积比为3:1混合而成；所述的无水硫酸钠与青霉素菌渣的质量比为(0.8～1.2):1；所述的正己烷的体积与青霉素菌渣的质量比为(0.8mL～1.2mL):1g；（4）活化处理：首先采用5.0mL甲醇过WatersOasis-C18固相萃取小柱，然后采用5.0mL蒸馏水过WatersOasis-C18固相萃取小柱，即完成WatersOasis-C18固相萃取小柱活化处理；（5）洗脱：在过柱流速为1.0mL·min-1～3.0mL·min-1和真空条件下将步骤二得到的青霉素提取液过步骤三得到的活化处理后WatersOasis-C18固相萃取小柱，然后采用质量分数为5%的甲醇水溶液淋洗，再采用洗脱液进行洗脱，洗脱得到的液体在水浴温度为24℃～26℃下N2吹干，然后加入复溶溶剂溶解N2吹干得到的固体，然后采用0.45μm针头过滤器过滤，得到待检测液；所述的洗脱液的体积与步骤二中所述的青霉素菌渣的质量比为(0.6mL～1.0mL):1g；所述的洗脱液由乙腈和甲醇按乙腈与甲醇的体积比为3:1混合而成；所述的复溶溶剂的体积与步骤二中所述的青霉素菌渣的质量比为0.2mL:1g；所述的复溶溶剂由乙腈和水按乙腈与水的体积比为1:1混合而成。2.根据权利要求1所述的青霉素检测方法，其特征在于，所述阴离子表面活性剂HLB值为2～13。3.根据权利要求1所述的青霉素检测方法，其特征在于，所述阴离子表面活性剂的HLB值为14～18。2CN106645466A说明书1/5页一种青霉素检测方法技术领域[0001]本发明涉及一种检测方法，具体是一种青霉素检测方法。背景技术[0002]抗生素作为一种主要的代表性兽药，在食品安全及世界贸易迅速发展的今天，受到了广泛的关注，目前对其检测仍然主要集中在动物源性食品中，主要的检测方法有高效液相色谱法，高效液相色谱-串联质谱法，毛细管电泳法，酶联免疫法。抗生素菌渣是抗生素生产企业在生产过程中的废弃物，底物主要由大豆、花生饼、玉米蛋白、淀粉等组成，外观呈豆腐渣样，气味因培养的菌类不同而异；内部含粗蛋白、脂肪、糖份等营养成分以及水和少量的抗生