一种青霉素检测方法及检测卡.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106771215A(43)申请公布日2017.05.31(21)申请号201611079065.5(22)申请日2016.11.30(71)申请人百奥森（江苏）食品安全科技有限公司地址214070江苏省无锡市滴翠路100号创意园三期A幢303(72)发明人周合张根义张进周朱晨杨敏胡彬吴念绮(51)Int.Cl.G01N33/577(2006.01)G01N33/531(2006.01)权利要求书1页说明书5页(54)发明名称一种青霉素检测方法及检测卡(57)摘要本发明公开了一种青霉素检测方法及检测卡，包括试剂和仪器，所述试剂包括青霉素钠盐、PB缓冲液、牛血清白蛋白、戊二醛溶液、去离子水、柠檬酸三钠、氯金酸、碳酸钾溶液、抗青霉素单抗、聚乙二醇20000、PH7.4PBS缓冲液、PBS缓冲液和羊抗鼠IgG，所述仪器包括滤膜、酒精灯、高速冷冻离心机、无菌过滤器、储备箱和烘干箱。该青霉素检测方法及检测卡，滴样后抗原抗体反应在检测卡上快速进行，大大缩短了检样时间，且样品无需特殊处理，滴样3-6分钟内即可得出结果，检测过程无需特殊仪器辅助，普通人员均可操作，不需要专业培训，极易使用，建构简单，生产成本低廉，检测准确率高，从而可以极大的提高青霉素的检测率，以及节约检测成本。CN106771215ACN106771215A权利要求书1/1页1.一种青霉素检测卡，包括试剂和仪器，其特征在于：检测卡制作包括如下步骤：S1，青霉素与载体蛋白偶联物的制备，取40-60mg青霉素钠盐溶于1.5-2.5ml水中，用8-12mlPB缓冲液（0.1mol/LPH6.0）溶解40-60mg牛血清白蛋白，加入到上述溶液中，再缓慢加入0.8-1.2ml10%戊二醛溶液，将混合溶液在室温下搅拌1.5-2.5h，用双蒸水透析4-6天，用滤膜进行过滤，收集；S2，胶体金溶液的制备，取100-200ml去离子水中加入1-2ml1%柠檬酸三钠，煮沸后加入1-2ml1%氯金酸，继续煮沸8-12min，冷却后，在4℃下保存备用；S3，胶体金标记抗青霉素单克隆抗体的制备，取已制备完成的50-150ml胶体金溶液，用0.1mol/L碳酸钾溶液将PH调至到8.0，一边搅拌上述溶液一边加入1.0-2.0mg抗青霉素单抗，搅拌20-30min，再逐渐滴入1-3ml25mol/L聚乙二醇20000，搅拌12-18min，然后上述溶液用20000rpm的高速冷冻离心机离心15min，弃除上层清液，加入8-12mlPH7.4PBS缓冲液清洗两次，用4-6ml含2%BSA的PBS缓冲液溶解，用0.22μm无菌过滤器过滤后，胶体金标记抗青霉素单克隆抗体在4℃的温度下保存备用；S4，青霉素检测卡的制备，将适当浓度的青霉素载体蛋白偶联物及羊抗鼠IgG喷在硝酸纤维素膜上，分别作为检测线和控制线，完成后，在37℃的烘干箱内干燥7-9h，将适当浓度的胶体金标记抗青霉素单克隆抗体喷在胶体金结合垫上，然后再37℃的烘干箱内干燥7-9h,在一个底板上依次粘上硝酸纤维素膜、胶体金结合垫、检测线、控制线和吸水垫。2.根据权利要求1所述的一种青霉素检测卡，其特征在于：所述试剂包括青霉素钠盐、PB缓冲液、牛血清白蛋白、戊二醛溶液、去离子水、柠檬酸三钠、氯金酸、碳酸钾溶液、抗青霉素单抗、聚乙二醇20000、PH7.4PBS缓冲液、PBS缓冲液和羊抗鼠IgG。3.根据权利要求1所述的一种青霉素检测卡，其特征在于：所述仪器包括滤膜、酒精灯、高速冷冻离心机、无菌过滤器、储备箱和烘干箱。4.一种青霉素检测方法，其特征在于：用待检验样品溶液滴入到胶体金结合垫上，样品溶液因硝酸纤维素膜载体的毛细管作用向另一端扩散，在扩散的过程中，抗原和抗体会发生相应的抗原抗体反应，并通过免疫胶体金的颜色现实出来，如果样品溶液中含有青霉素，青霉素先和胶体金颗粒上的抗体反应，因此当胶体金颗粒随样品溶液扩散至检测线时，胶体金颗粒上抗体的活性位点呗样品溶液中的青霉素占据而无法与检测线上青霉素抗原结合，当样品中的青霉素含量超过检测卡检测最大限度时，检测卡上的检测线显色较控制线浅甚至会显示无色，判定为阳性，当样品中青霉素含量较低时，检测卡上检测线显色与控制线相近甚至显示颜色较深，判定为阴性。5.根据权利要求4所述的一种青霉素检测方法，其特征在于：取1-4ml原奶加入10ml离心管中，再加入60μL3mol/LHCI溶液，振荡30-40秒，加入2-6ml乙酸乙酯，剧烈振荡1-2分钟，静置分层，去2-4ml上层溶液到另一离心管中，加入250μLPB缓冲液（0.1mol/LPH7.4）,振荡1-2分钟，静置分层，吸取80-150μL下层溶液，取出检测卡，用滴灌吸取待检溶液，在硝酸纤维素膜上