一种青霉素菌渣中青霉素残留的液质联用检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113624858A(43)申请公布日2021.11.09(21)申请号202110714444.1(22)申请日2021.06.25(71)申请人伊犁川宁生物技术股份有限公司地址835000新疆维吾尔自治区伊犁哈萨克自治州霍尔果斯市经济开发区伊宁园区阿拉木图亚村516号(72)发明人刘淑云董丽萍任立人邓留杰韩丽丽李志杰关茹飞(74)专利代理机构成都高远知识产权代理事务所(普通合伙)51222代理人张娟郑勇力(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/06(2006.01)G01N30/72(2006.01)权利要求书1页说明书3页附图1页(54)发明名称一种青霉素菌渣中青霉素残留的液质联用检测方法(57)摘要本发明属于微生物发酵培养基残渣的检测技术领域，具体涉及一种青霉素菌渣中青霉素残留的液质联用检测方法。本发明的检测方法包括如下步骤：(1)用水溶解菌渣中的残留成分，得到供试品溶液；(2)将青霉素标准品制成标准品溶液；(3)采用超高效液相色谱‑质谱联用检测供试品溶液和标准品溶液，得到供试品溶液和标准品溶液的谱图，通过外标法计算菌渣中青霉素的含量。本发明的方法能够实现青霉素含量的快速检测，且检测结果准确度高、灵敏度高、专属性强、重现性好，在青霉素菌渣的无害化处理和资源化利用中具有很好的应用前景。CN113624858ACN113624858A权利要求书1/1页1.一种青霉素菌渣中青霉素残留的液质联用检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)用水溶解菌渣中的残留成分，得到供试品溶液；(2)将青霉素标准品制成标准品溶液；(3)采用超高效液相色谱‑质谱联用检测供试品溶液和标准品溶液，得到供试品溶液和标准品溶液的谱图，计算菌渣中青霉素的含量；其中，色谱条件为：色谱柱为C18柱；流动相包括弱极性相和强极性相，所述弱极性相选自甲醇或乙腈，强极性相选自甲酸水溶液、乙酸水溶液、甲酸‑甲酸铵溶液或乙酸‑乙酸铵溶液，其中酸含量为0.1％～1.0％(v/v)，铵盐浓度为0.1mM～0.5M。2.按照权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤(1)中，所述菌渣含水率为2％～95％；和/或，所述菌渣与水的用量比例为0.5～5.0g:10～50mL。3.按照权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤(1)中，所述供试品溶液通过如下方式得到：将菌渣用水定容后，涡旋振荡2～10min，然后4000～8000rpm/min，离心5～10min，取上清液，过0.22～0.45μm无机微孔滤膜。4.按照权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤(3)中，所述色谱条件还包括：色谱柱为Waters‑C18柱；流动相以甲醇为弱极性相，0.1％(v/v)甲酸水溶液为强极性相。5.按照权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤(3)中，所述色谱条件还包括：洗脱过程为梯度洗脱，洗脱程序包括初始阶段、中间阶段和末尾阶段，所述初始阶段的时长为0‑1.5min，初始阶段弱极性相的体积比为5％～10％；所述中间阶段的时长为2.5‑5min，中间阶段弱极性相的体积比的范围选自30％～95％；所述末尾阶段的时长为10‑12min，末尾阶段弱极性相的体积比为5％～10％。6.按照权利要求5所述的检测方法，其特征在于：步骤(3)中，所述洗脱程序为：初始阶段：0‑1.5min，弱极性相的体积比为10％；中间阶段：4min，弱极性相的体积比为40％；7‑9min，弱极性相的体积比为60％；末尾阶段：10‑11min，弱极性相的体积比为10％。7.按照权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤(3)中，所述色谱条件还包括：流速为0.2～0.4mL/min；和/或，柱温为25～40℃；和/或，进样量为2～20μL。8.按照权利要求7所述的检测方法，其特征在于：步骤(3)中，所述色谱条件还包括：流速为0.25mL/min；和/或，柱温为35℃；和/或，进样量为10μL。9.按照权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤(3)中，所述质谱条件为：电离方式为电喷雾正离子模式；和/或，离子源温度为150～200℃；和/或，去溶剂气温度为400～600℃；和/或，去溶剂气流量为400～800L/h；和/或，喷雾电压为2.8～3.5kv；和/或，锥孔电压为20～30V；和/或，碰撞电压12～20V；和/或，扫描模式为多反应监测模式，扫描母离子m/z为335.03，子离子m/z为159.97。10.按照权利要求9所述的检测方法，其特征在于：步骤(3)中，所述质谱条件为：电离方式为电喷雾正离子模式；和/或，离子源温度为150℃；和/或，去溶剂气温度为450℃；和/或，去溶剂气流量为650mL/min；和/或，喷