一种检测大麻二酚的时间分辨荧光微球免疫层析试纸条及其制备方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115327126A(43)申请公布日2022.11.11(21)申请号202210953074.1G01N33/543(2006.01)(22)申请日2022.08.10G01N33/531(2006.01)G01N33/533(2006.01)(71)申请人郑州左安检测科技有限公司地址450001河南省郑州市高新区碧桃路20号20号楼2栋郑州高新企业加速器产业园D7-6号楼(72)发明人吕小翠贾嘉袁利杰孟二娟赵琳夏静雪石小青陈丽丽崔浩哲纪元(74)专利代理机构郑州中民专利代理有限公司41110专利代理师黄宇亭(51)Int.Cl.G01N33/58(2006.01)G01N33/558(2006.01)权利要求书2页说明书7页附图3页(54)发明名称一种检测大麻二酚的时间分辨荧光微球免疫层析试纸条及其制备方法和应用(57)摘要一种检测大麻二酚的时间分辨荧光微球免疫层析试纸条及其制备方法和应用，该试纸条包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和底板。结合物释放垫上喷涂有时间分辨荧光微球标记的大麻二酚单克隆抗体，反应膜上固定有检测线与质控线，检测线包被有大麻二酚半抗原‑载体蛋白偶联物，质控线包被有山羊抗小鼠二抗。大麻二酚单克隆抗体是以大麻二酚‑半抗原载体蛋白偶联物作为免疫原获得，该大麻二酚半抗原最大程度保留了大麻二酚特征结构。本发明以时间分辨荧光微球标记抗体，采用免疫层析技术，实现对样本中的大麻二酚快速免疫分析，灵敏度高，定量准确，检测快速、操作方便，能够实现对大批量的样品进行快速检测和现场检测。CN115327126ACN115327126A权利要求书1/2页1.一种检测大麻二酚的时间分辨荧光微球免疫层析试纸条，试纸条包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和底板；其特征在于：结合物释放垫上喷涂有时间分辨荧光微球标记的大麻二酚单克隆抗体，反应膜上固定有检测线与质控线，检测线包被有大麻二酚半抗原‑载体蛋白偶联物，质控线包被有山羊抗小鼠二抗，大麻二酚单克隆抗体是以大麻二酚半抗原与载体蛋白偶联物作为免疫原获得，大麻二酚半抗原由以下方法制备而成：由3,5‑二甲氧基苯甲醛与三乙基‑4‑磷化物反应生成（2E，4E）‑5‑（3,5‑二甲氧基苯基）‑2,4‑戊二烯酸乙酯，随后经PdC/H2还原，HBr/HoAc脱甲基和皂化反应得到5‑（3,5‑二羟苯基）戊酸，最后再与(1S,4R)‑1‑甲基‑4‑(1‑甲基乙烯基)‑2‑环己烯‑1‑醇反应得到，所述大麻二酚半抗原的结构式如下：。2.根据权利要求1所述的免疫层析试纸条，其特征在于：所述反应膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜。3.根据权利要求1所述的免疫层析试纸条，其特征在于：所诉时间分辨荧光微球是直径为100‑500nm的稀土离子作为包埋物的荧光微球，其表面修饰有功能基团，用于蛋白、抗体和核酸的共价偶联。4.根据权利要求1所述的免疫层析试纸条，其特征在于：所述时间分辨荧光微球的激发波长为300‑400nm，发射波长为500‑700nm。5.根据权利要求1所述的免疫层析试纸条，其特征在于：所述大麻二酚半抗原‑载体蛋白偶联物是由大麻二酚半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白为血蓝蛋白、牛血清白蛋白、卵清蛋白、人血清白蛋白或甲状腺蛋白。6.根据权利要求1所述的免疫层析试纸条，其特征在于：所述结合物释放垫可为玻璃纤维或聚酯纤维。7.根据权利要求1所述的免疫层析试纸条，其特征在于：制备大麻二酚半抗原的具体反应过程如下：2CN115327126A权利要求书2/2页。8.一种制备权利要求1‑7任一项所述免疫层析试纸条的方法，其特征在于：主要包括以下步骤：1）制备喷涂时间分辨荧光微球标记的大麻二酚单克隆抗体释放垫；2）制备具有包被有大麻二酚半抗原‑载体蛋白偶联物的检测线和包被有山羊抗小鼠二抗的质控线的反应膜；3）将1）和2）制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和底板组装成试纸条。9.一种应用权利要求1‑7任一项所述免疫层析试纸条检测工业大麻中大麻二酚含量的方法，其特征在于：主要步骤包括：将待测样本进行前处理，得到待测样本溶液；用权利要求1‑7任一项所述的试纸条检测待测样本溶液；将检测卡插入免疫荧光分析仪，分析仪可通过内置的标准曲线计算出样品中大麻二酚的浓度，分析检测结果。3CN115327126A说明书1/7页一种检测大麻二酚的时间分辨荧光微球免疫层析试纸条及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明属于试纸条制备与应用技术领域，具体是一种检测大麻二酚的时间分辨荧光微球免疫层析试纸条及其制备方法和应用。背景技术[0002]大麻二酚即CBD，是一种从大麻中提取的植物大麻素，缺乏精神活性，具有镇痛、抗炎、抗肿瘤和化学预防活性。大麻二