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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106866454A(43)申请公布日2017.06.20(21)申请号201710106563.2C07K16/44(2006.01)(22)申请日2017.02.27G01N33/531(2006.01)(71)申请人海南大学地址570208海南省海口市人民大道58号(72)发明人赵洪伟阮孙兰刁晓平(74)专利代理机构深圳市千纳专利代理有限公司44218代理人李平(51)Int.Cl.C07C233/18(2006.01)C07C231/12(2006.01)C07K14/765(2006.01)C07K14/77(2006.01)C07K14/795(2006.01)C07K1/107(2006.01)权利要求书3页说明书6页附图3页(54)发明名称一种氯霉素半抗原及其制备方法和应用(57)摘要本发明公开了一种半抗原及其制备方法和应用,具体涉及一种氯霉素半抗原。本发明还公开了所述半抗原的制备方法及其应用。本发明提供的氯霉素半抗原既最大程度地保留了氯霉素的化学结构,又通过化学合成改造引入了可以与蛋白质偶联的-COOH,合成方法简单,纯度、产率较高;用该半抗原作为原料,制备适于动物免疫的抗原体系免疫动物,所得抗体的效价、特异性、亲和力都比较好;所得的抗体可用于酶联免疫试剂盒,使用方便、检测成本低、检测方法高效、准确、快速、可同时检测大批量的样本,适于动物源性食品中氯霉素残留的现场监控和大量样本的筛查。本发明的氯霉素半抗原在氯霉素的检测中发挥重要作用。CN106866454ACN106866454A权利要求书1/3页1.一种氯霉素半抗原,其特征在于,其分子结构式为:2.一种如本发明第一个方面所述的氯霉素半抗原的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤1,取氯霉素,加入叔丁基二甲基氯硅烷、咪唑和无水N,N-二甲基甲酰胺,室温反应完全,纯化,得到TBS-氯霉素,其分子结构式如式(2)所示,其中氯霉素、叔丁基二甲基氯硅烷、咪唑和无水二甲基甲酰胺的用量比为:1g︰700-800mg︰300-500mg︰3-7mL;步骤2,取TBS-氯霉素,加入二氯甲烷溶解,加入丁二酸酐、4-二甲氨基吡啶和三乙胺,室温反应完全,纯化,得到含琥珀酰基-TBS-氯霉素,其分子结构式如式(3)所示,其中TBS-氯霉素、丁二酸酐、4-二甲氨基吡啶和三乙胺的用量比为:0.9746g︰0.81-0.83g︰0.24-0.26g︰100-300μL;步骤3,取含琥珀酰基-TBS-氯霉素,加入吡啶、乙腈和40%HF,冰浴冷却后,室温反应完全,纯化,得到权利要求1所述的氯霉素半抗原,其中含琥珀酰基-TBS-氯霉素、吡啶、乙腈和40%HF的用量比为:954.94mg︰2-4mL︰5-7mL︰1.5-2mL;2CN106866454A权利要求书2/3页3.一种氯霉素抗原,其特征在于,由权利要求1所述的氯霉素半抗原与载体蛋白偶联得到,其分子结构式为:4.一种制备如权利要求3所述的氯霉素抗原的方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤a,取权利要求1所述的氯霉素半抗原,加入无水N,N-二甲基甲酰胺混匀后,加入二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺,室温反应过夜,其中,氯霉素半抗原、二环己基碳二3CN106866454A权利要求书3/3页亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的用量比为:0.09mmol︰0.09-0.15mmol︰0.09-0.15mmol;步骤b,离心,取溶液,将溶液缓慢加入载体蛋白溶液中,所用载体蛋白的量按照半抗原与载体蛋白的摩尔比15-40︰1计;步骤c,反应完全后,透析,得到氯霉素抗原。5.一种氯霉素抗体,其特征在于,由权利要求3所述的氯霉素抗原免疫动物制备得到。6.由权利要求5所述的氯霉素抗体制备的氯霉素酶联免疫试剂盒。7.权利要求1所述的氯霉素半抗原或权利要求3所述的氯霉素抗原在制备氯霉素抗体中的应用。8.权利要求5所述的氯霉素抗体或权利要求6所述的氯霉素酶联免疫试剂盒在检测动物源性食品中氯霉素残留的应用。4CN106866454A说明书1/6页一种氯霉素半抗原及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明涉及一种半抗原及其制备方法和应用,尤其涉及一种氯霉素半抗原及其制备方法和应用。背景技术[0002]氯霉素(Chloramphenicol,CAP)是Ehrlich(1947)分离出来的一种广谱抗生素。由于其低廉的价格和稳定的抗菌性,曾在一段时间内作为饲料添加剂和兽医临床常用药品。但氯霉素有严重的毒副作用,能引起再生障碍性贫血症和婴儿灰色综合症。美国和欧共体已禁止在动物中使用氯霉素,并规定在动物源食品中不得检出,且这种不得检出的低限已达到0.01μg/kg。目前,我国动物源食品中氯霉素残留仍很严重