一种多效唑半抗原及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106966996A(43)申请公布日2017.07.21(21)申请号201710158844.2(22)申请日2017.03.17(71)申请人海南大学地址570228海南省海口市人民大道58号(72)发明人赵洪伟靳晓拓刁晓平(74)专利代理机构深圳市千纳专利代理有限公司44218代理人李平(51)Int.Cl.C07D249/08(2006.01)C07K14/765(2006.01)C07K14/77(2006.01)C07K14/795(2006.01)C07K16/44(2006.01)G01N33/531(2006.01)权利要求书3页说明书6页附图4页(54)发明名称一种多效唑半抗原及其制备方法和应用(57)摘要本发明公开了一种半抗原及其制备方法和应用，具体涉及一种多效唑半抗原。本发明还公开了所述多效唑半抗原的制备方法及其应用。本发明提供的多效唑半抗原既最大程度地保留了多效唑的化学结构，又通过化学合成改造引入了可以与蛋白质偶联的-COOH，合成方法简单，纯度、产率较高；用该半抗原作为原料，制备适于动物免疫的抗原体系免疫动物，所得抗体的效价、特异性、亲和力都比较好；所得的抗体可用于酶联免疫试剂盒，使用方便、检测成本低、检测方法高效、准确、快速、可同时检测大批量的样本，适于土壤和水果食品中多效唑残留的现场监控和大量样本的筛查。本发明的多效唑半抗原在多效唑的检测中发挥重要作用。CN106966996ACN106966996A权利要求书1/3页1.一种多效唑半抗原，其特征在于，其分子结构式如(1)所示：2.一种如权利要求1所述的多效唑半抗原的制备方法，包括以下步骤：步骤1，取1,2,4-三氮唑，加无水碳酸钾、乙醇，60℃反应完全，纯化，得到3,3-二甲基-1-(1’,2’,4’-三氮唑-1-基)-2-丁酮，其分子结构式如式(2)所示，其中1,2,4-三氮唑和无水碳酸钾的用量比为：8.4g︰15-20g；步骤2，取3,3-二甲基-1-(1’,2’,4’-三氮唑-1-基)-2-丁酮溶于无水DMF中，取NaH溶于无水DMF中，将3,3-二甲基-1-(1’,2’,4’-三氮唑-1-基)-2-丁酮的DMF溶液逐滴加入到NaH的DMF溶液中，反应完全冷却后，加4-硝基氯化苄溶于无水DMF溶液，并逐滴将4-硝基氯化苄的DMF溶液滴加到反应液中，反应完全，纯化，得产物4,4-二甲基-1-(4’-硝基苯基)-2-(1’,2’,4’-三氮唑-1-基)-3-戊酮，其分子结构式如式(3)所示，其中3,3-二甲基-1-(1’,2’,4’-三氮唑-1-基)-2-丁酮、NaH、4-硝基氯化苄的用量比为：3.38g︰0.4-0.6g︰3-4g；步骤3，取产物4,4-二甲基-1-(4’-硝基苯基)-2-(1’,2’,4’-三氮唑-1-基)-3-戊酮和NaBH4溶于甲醇中，室温反应完全，纯化，得产物4,4-二甲基-1-(4’-硝基苯基)-2-(1’,2’,4’-三氮唑-1-基)-3-戊醇，其分子结构式如式(4)所示，其中4,4-二甲基-1-(4’-硝基苯基)-2-(1’,2’,4’-三氮唑-1-基)-3-戊酮和NaBH4的用量比为：0.923g︰0.16-0.2g；2CN106966996A权利要求书2/3页步骤4，取4,4-二甲基-1-(4’-硝基苯基)-2-(1’,2’,4’-三氮唑-1-基)-3-戊醇，加最小量乙酸至完全溶解，然后分批慢慢加入4-6个当量的Fe粉，约0.8-1.5h加完，反应完全，纯化，得产物4,4-二甲基-1-(4’-氨基苯基)-2-(1’,2’,4’-三氮唑-1-基)-3-戊醇，其分子结构式如式(5)所示；步骤5，取4,4-二甲基-1-(4’-氨基苯基)-2-(1’,2’,4’-三氮唑-1-基)-3-戊醇，加CH2CH2、丁二酸酐、三乙胺，室温搅拌反应完全，纯化，得到权利要求1所述的多效唑半抗原，其中4,4-二甲基-1-(4’-氨基苯基)-2-(1’,2’,4’-三氮唑-1-基)-3-戊醇、CH2CH2、丁二酸酐、三乙胺的用量比为：1.2mmol︰4-6ml︰2.5-3.5mmol︰1.5-2.5mmol。3.一种多效唑抗原，由本发明第一个方面所述的多效唑半抗原与载体蛋白偶联得到，其分子结构式如式(6)所示：。4.一种制备如权利3所述的多效唑抗原的方法，包括以下步骤：步骤a，取权利要求1所述的多效唑半抗原，加入无水二甲基甲酰胺混匀后，加入二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺，室温反应过夜，其中，多效唑半抗原、二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的用量比为：0.09mmol︰0.08-0.12mmol︰0.08-0.12mmol；步骤b，离心，取溶液，将