胎盘提取物及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107375334A(43)申请公布日2017.11.24(21)申请号201710652265.3(22)申请日2017.08.02(71)申请人广州准优生物科技有限公司地址510000广东省广州市开发区国际生物岛螺旋四路第五号第6层602、603单元(72)发明人吴道贫李文禄赖小华陶然(74)专利代理机构广州华进联合专利商标代理有限公司44224代理人向薇(51)Int.Cl.A61K35/50(2015.01)A61P15/08(2006.01)权利要求书1页说明书6页(54)发明名称胎盘提取物及其制备方法和应用(57)摘要本发明公开了一种胎盘提取物及其制备方法和应用，其是将胎盘组织经冷冻处理，提取有效成分，再将有效成分进行纯化后得到的。本发明的胎盘提取物的活性成分经多步技术纯化制得，不仅保留了胎盘中的胶原、多肽、多种生长因子等有效成分，并且不含有细胞成分，避免了细胞制剂的安全性和免疫排斥问题，操作方法简单可控，能够简单实现大规模制备，货架式推广，时间短，无制备周期；可以制成生物凝胶制剂，促进卵巢早衰患者的卵巢功能重建，具有很好的治疗卵巢早衰的效果，其活性成分为人体天然成分，无需口服激素治疗，无激素依赖性，采用粘膜透皮吸收，吸收充分，与口服激素相比安全性更好。CN107375334ACN107375334A权利要求书1/1页1.一种胎盘提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)、将充分清洗、并去除血管和粘膜组织的新鲜健康胎盘组织置于20-80mmoL/L的pH2.0-6.0的乙酸-乙酸钠缓冲液中匀浆，将匀浆液置于4℃水浴中保温1-4小时，期间不时搅拌，恢复至室温后冷冻离心，得到沉淀和上清；(2)、于4℃，向步骤(1)中的上清缓慢滴加4-12倍上清体积的-20℃预冷的乙醇，滴加过程中不断搅拌，冷冻离心，取上清；(3)、旋转蒸发将步骤(2)的上清蒸发，得到蛋黄色粘稠物，用生理盐水将淡黄色粘稠物溶解，离心，取上清；(4)、向步骤(1)中的沉淀加入3-5倍重量的去离子水，搅拌，调pH7.0-9.0，加入0.01-20％胰蛋白酶，水解6-8小时，冷冻离心后取上清，与步骤(3)中的上清混合，即为胎盘提取物粗制品；(5)、用0.1-0.5μm滤膜过滤步骤(4)的胎盘提取物粗制品，DE-52阴离子交换层析，收集所有活性峰，经HPLC进一步纯化后，生理盐水配制，即得胎盘提取物。2.根据权利要求1所述的胎盘提取物的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述旋转蒸发的温度为20-60℃。3.根据权利要求1所述的胎盘提取物的制备方法，其特征在于，步骤(5)中所述DE-52阴离子交换层析采用的层析柱经50mmol/L的pH6.5的Tris-HCl缓冲液平衡，上样后用同样的缓冲液进行洗脱，流速均为12-20mL/h。4.根据权利要求1所述的胎盘提取物的制备方法，其特征在于，步骤(1)和(2)中所述冷冻离心的条件为：4℃，6600r/min，30min。5.根据权利要求1所述的胎盘提取物的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述离心条件为：16000r/min,20min。6.权利要求1～5任一项所述的制备方法制备得到的胎盘提取物。7.权利要求6所述的胎盘提取物在制备治疗卵巢早衰药物中的应用。8.一种治疗卵巢早衰的生物凝胶制剂，其特征在于，所述生物凝胶制剂包括作为活性成分的上述胎盘提取物和凝胶基质，所述胎盘提取物为所述生物凝胶制剂的90-99.5％v/v。9.根据权利要求8所述的治疗卵巢早衰的生物凝胶制剂，其特征在于，所述凝胶基质为卡波姆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基纤维素、海藻酸钠、明胶或其组合物。10.根据权利要求9所述的治疗卵巢早衰的生物凝胶制剂，其特征在于，所述凝胶基质为卡波姆，所述胎盘提取物为所述生物凝胶制剂的98-99.5％v/v。2CN107375334A说明书1/6页胎盘提取物及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明属于生物技术领域，更具体地，本发明涉及一种胎盘提取物及其制备方法和应用。背景技术[0002]卵巢早衰，即卵巢功能早衰(prematureovarianfailure，POF)是指40岁以下妇女因卵巢功能衰竭出现闭经、雌激素分泌下降、促性腺激素水平增高的一种由多种病因引起的疾病。[0003]POF的发病率逐年增高，在女性不孕患者中所占的比例亦有逐年上升的趋势。POF对妇女生殖健康的两大威胁主要是雌激素水平降低及生育能力丧失，雌激素水平降低增加了妇女患骨质疏松和冠心病的危险。而处于生育期的妇女提早闭经，生育能力丧失，会导致一系列心理和社会问题，如易出现抑郁、焦虑、人际交往困难、敌对等情绪、社交方面的心理卫生问题以及婚姻生活质量下降。由于肿