一种鹰嘴豆豆瓣多肽的制备方法及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107988301A(43)申请公布日2018.05.04(21)申请号201810025491.3A23L33/185(2016.01)(22)申请日2018.01.11A23L33/18(2016.01)A61K38/01(2006.01)(71)申请人中国科学院新疆理化技术研究所A61P31/04(2006.01)地址830011新疆维吾尔自治区乌鲁木齐A61P31/10(2006.01)市北京南路40号附1号(72)发明人阿布力米提·伊力艾合米丁·外力阿吉艾克拜尔·艾萨高彦华夏热菲鼎·米日扎艾合米多瓦(74)专利代理机构乌鲁木齐中科新兴专利事务所65106代理人张莉(51)Int.Cl.C12P21/06(2006.01)C07K1/34(2006.01)权利要求书1页说明书8页附图2页(54)发明名称一种鹰嘴豆豆瓣多肽的制备方法及其应用(57)摘要本发明涉及一种鹰嘴豆豆瓣多肽的制备方法及其应用，该方法中采用鹰嘴豆豆瓣油脂成分充分脱脂，磷酸缓冲溶液提取，中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶或木瓜蛋白酶四种酶水解，利用超滤膜技术制备分子量为6-10kDa，3.5-6kDa，1-3.5kDa的多肽，再利用喷雾干燥或冷冻干燥精制而成。该多肽粉被验证其抗细菌和真菌活性，具有广泛的抗微生物活性，同时具有增强体液免疫及全身免疫的功能，富含人体易消化和吸收的纯天然植物来源多肽和蛋白质。该蛋白质的特点是既保留了鹰嘴豆原有的生物活性的同时还实现变废为宝和资源充分利用的目的；该蛋白质作为天然抗菌剂、食品添剂或药物，可用于食品和医药行业。CN107988301ACN107988301A权利要求书1/1页1.一种鹰嘴豆豆瓣多肽的制备方法，其特征在于按下列步骤进行：a、将鹰嘴豆发芽脱皮后的干燥的豆瓣粉碎，过80目筛，按w/v豆粉:石油醚=1:5加入石油醚，在室温下振荡4h进行脱脂，反复提取3-4次至无色为止，鹰嘴豆豆瓣粉自然沉降与石油醚分离后，倾倒出上层石油醚进行回收，合并沉淀物，自然干燥，得到脱脂的鹰嘴豆豆瓣粉，置于温度-20℃冰箱保存备用；b、将步骤a中脱脂后的100g鹰嘴豆豆瓣粉中加350mlpH为7.4，0.1M的磷酸缓冲液，料液比为1:3.5，温度为4℃，提取48h；c、将步骤b中的提取液经过滤、10000r/min，温度4℃，离心10min，温度4℃，透析48h，压力9.8Pa，温度-80℃，冻干24h，得到10.27g粗提蛋白粉，蛋白提取率为10.27%；d、将步骤c中的粗提蛋白粉电泳，测抗菌活性，测蛋白含量19.14%；e、将步骤d中的粗提蛋白粉通过中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶或木瓜蛋白酶水解，得到的鹰嘴豆豆瓣总多肽，再经超滤，分离，酶解，冷冻干燥得到多肽粉；f、将步骤e中的酶解物离心，取上清液经10kDa再生纤维滤膜截流分离，压力0.10MPa，温度25℃，流速35m/s，保留浓缩液，再将滤出液分别经6kDa，3.5kDa再生纤维滤膜截流分离，依次制备分子量为6-10kDa，3.5-6kDa，1-3.5kDa的多肽，然后取各部分多肽溶液进行真空干燥，利用液质联LC/MS仪器检测不同分子量多肽。2.根据权利要求1所述方法获得的鹰嘴豆豆瓣多肽在制备抗细菌生物活性中的药物的用途。3.根据权利要求1所述方法获得的鹰嘴豆豆瓣多肽在制备抗真菌生物活性的食品中的用途。4.根据权利要求1所述方法获得的鹰嘴豆豆瓣多肽在制备食品添加剂中的用途。2CN107988301A说明书1/8页一种鹰嘴豆豆瓣多肽的制备方法及其应用技术领域[0001]本发明涉及一种鹰嘴豆豆瓣多肽的制备方法及其应用。背景技术[0002]鹰嘴豆(CicerarietinumL.)，别名桃豆、鸡豌豆，豆科鹰嘴豆属，豆科蝶形花亚科典型代表植物，一年生或多年生草本植物，因形如鹰头在种脐附近有喙状突起而得名。鹰嘴豆原产于西亚土耳其一带，早在2500年前就已传入了我国新疆，目前，在世界各地均有栽培，我国主要分布在西部、北部等干旱和半干旱地区种植，非常耐干旱和贫瘠，而且具有固氮作用。1994年FAO的统计数据表明，鹰嘴豆的种植面积占整个世界经济作物种植总面积的15％，约为1020万公顷，产量高达7900万吨，占总产量的14％，属于世界第二大消费豆类，产量在大豆、豌豆之后，居世界豆类第三位。[0003]鹰嘴豆中所含的营养成分非常丰富，无论是从种类，还是数量上，都大大超过其他豆类，是一种天然的植物蛋白资源。其中蛋白质的含量约占籽粒干重的15％-30％，与鱼、肉、鸡蛋相似，是燕麦的两倍。蛋白功效比约为2.8，远远高于豌豆、大豆和芸豆等豆类产品，而且其消化率可以达到79％-88％。鹰嘴豆蛋白中氨基酸含量高而且组成均衡，包括