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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114231582A(43)申请公布日2022.03.25(21)申请号202111495527.2A23L33/18(2016.01)(22)申请日2021.12.09(71)申请人广州中医药大学(广州中医药研究院)地址510000广东省广州市番禺区大学城外环东路232号(72)发明人廖琼峰陈国平张嘉娴(74)专利代理机构北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙)11463代理人宋南(51)Int.Cl.C12P21/06(2006.01)C07K1/16(2006.01)A61K38/01(2006.01)A61P3/10(2006.01)权利要求书2页说明书7页附图3页(54)发明名称一种鹰嘴豆肽及其制备方法和应用(57)摘要本发明公开了一种鹰嘴豆肽及其制备方法和应用,涉及生物活性肽的制备技术领域。所述制备方法包括将鹰嘴豆蛋白悬液与碱性蛋白酶的混合溶液进行反应,反应时间大于1.5h,反应后使酶失活,分离获得初始的鹰嘴豆肽。本发明提供的制备方法获得的鹰嘴豆肽具有较好的α‑葡萄糖苷酶抑制活性,水溶性好,吸收快,不易引起过敏反应,可应用于药物组合物、保健品、食品添加剂等领域。此外,该制备方法的条件温和,简便易行,成本低,重现性好,样品回收率高,为开发相关产品奠定了基础。CN114231582ACN114231582A权利要求书1/2页1.一种鹰嘴豆肽的制备方法,其特征在于,其包括以下步骤:将鹰嘴豆蛋白悬液与碱性蛋白酶的混合溶液进行反应,反应时间大于1.5h,反应后使酶失活,分离获得初始的鹰嘴豆肽。2.根据权利要求1所述的鹰嘴豆肽的制备方法,其特征在于,所述反应时间为1.5~4h;优选地,在所述混合溶液中,鹰嘴豆蛋白的添加质量与所述混合溶液的体积的百分比为1%~5%;碱性蛋白酶的添加体积与所述混合溶液的体积的百分比为0.1%~0.7%;优选地,鹰嘴豆蛋白悬液与碱性蛋白酶混合反应时的温度为58~60℃;优选地,鹰嘴豆蛋白悬液与碱性蛋白酶混合反应时,采用碱性溶液使得反应体系中的pH为7.8~8.2;优选地,所述制备方法还包括先将鹰嘴豆蛋白悬液沸水浴10~20min,待悬液温度降至55~65℃时,采用碱性溶液使得悬液中的pH为7.8~8.2后,再用于与所述碱性蛋白酶混合反应。3.根据权利要求1或2所述的鹰嘴豆肽的制备方法,其特征在于,所述制备方法还包括将采用大孔树脂对所述初始的鹰嘴豆肽进行富集;优选地,所述富集的步骤包括:将所述初始的鹰嘴豆肽配制成的鹰嘴豆肽溶液上样大孔树脂柱进行吸附;采用第一洗脱液对大孔树脂柱进行洗脱,收集洗脱后的产物作为富集产物;优选地,所述第一洗脱液为体积浓度为50%~95%的乙醇溶液;优选地,在吸附后,洗脱前,所述富集的步骤还包括:用水对大孔树脂柱进行洗涤;优选地,所述大孔树脂选自大孔树脂HP20、HPD500、NKA‑9、AB‑8、D3520和DA201‑C中的任意一种;优选地,所述大孔树脂为大孔树脂DA201‑C。4.根据权利要求3所述的鹰嘴豆肽的制备方法,其特征在于,所述鹰嘴豆肽溶液的制备方法如下:将初始的鹰嘴豆肽与水混合,配制为浓度为40~60mg/mL的鹰嘴豆肽溶液。5.根据权利要求3所述的鹰嘴豆肽的制备方法,其特征在于,所述制备方法还包括对富集产物进行葡聚糖凝胶分离;优选地,所述葡聚糖凝胶分离包括:将所述富集产物上样玻璃层析柱,采用第二洗脱液对层析柱进行洗脱,收集洗脱产物;优选地,所述第二洗脱液为水;优选地,所述第二洗脱液的洗脱速度为0.1~1mL/min。6.根据权利要求5所述的鹰嘴豆肽的制备方法,其特征在于,所述收集洗脱产物的步骤包括:测定215nm处的吸光度,制洗脱曲线,根据洗脱曲线,合并同一洗脱峰内的洗脱产物,旋转蒸发浓缩后冷冻干燥,获得最终的鹰嘴豆肽。7.根据权利要求1或2所述的鹰嘴豆肽的制备方法,其特征在于,所述鹰嘴豆蛋白悬液由鹰嘴豆蛋白与水配制获得,所述鹰嘴豆蛋白为脱脂鹰嘴豆粉依次经碱性溶液提取、酸性溶液沉淀后获得的;优选地,所述碱性溶液包括体积浓度为0.15%~0.35%的Na2SO3溶液,所述酸性溶液包括HCl。8.一种鹰嘴豆肽,其特征在于,其由权利要求1~7任一项所述的鹰嘴豆肽的制备方法2CN114231582A权利要求书2/2页制备获得。9.一种保健品或药物组合物,其特征在于,其包括如权利要求8所述的鹰嘴豆肽以及载体。10.如权利要求8所述的鹰嘴豆肽在制备具有降糖作用的药物或保健品中的应用;优选地,所述具有降糖作用包括具有α‑葡萄糖苷酶抑制活性。3CN114231582A说明书1/7页一种鹰嘴豆肽及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明涉及生物活性肽的制备技术领域,具体而言,涉及一种鹰嘴豆肽及其制