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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108728508A(43)申请公布日2018.11.02(21)申请号201810616068.0(22)申请日2018.06.14(71)申请人云南省热带作物科学研究所地址666100云南省西双版纳傣族自治州景洪市宣慰大道99号(72)发明人郭刚军邹建云马尚玄付镓榕黄克昌徐荣(74)专利代理机构成都帝鹏知识产权代理事务所(普通合伙)51265代理人黎照西(51)Int.Cl.C12P21/06(2006.01)C07K1/34(2006.01)权利要求书1页说明书8页附图1页(54)发明名称一种具有抗菌活性澳洲坚果多肽的制备方法(57)摘要本发明提供了一种制备具有抗菌活性澳洲坚果多肽的方法,属于植物多肽制备领域。本发明提供的方法,是以澳洲坚果粕为原料,通过加入特定的复合酶进行酶解,从而实现水解蛋白获得具有特定结构的多肽,再通过对多肽进行分子量截留而获得。采用本发明方法获得的澳洲坚果多肽表现出对多种菌种均具有较强的抑菌活性。CN108728508ACN108728508A权利要求书1/1页1.一种具有抗菌活性澳洲坚果多肽的制备方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:(1)取澳洲坚果果仁,经烘干后进行冷榨脱脂,得到澳洲坚果粕,经乙醇充分浸提后,向浸提液中加入复合酶进行酶解,调节酶解的pH值为7.5~8.0,酶解温度为45~50℃,酶解反应的时间为1.5~2.0h;所述复合酶的组成按质量比计为:中性蛋白酶:碱性蛋白酶:木瓜蛋白酶=2:1:1,复合酶用量为澳洲坚果粕质量的1~1.5%;酶解完毕后进行灭酶处理,得到澳洲坚果酶解多肽液;(2)将步骤(1)所得酶解多肽液冷却至室温,离心后取上清液,调pH值至4.6,静置30min后再次离心,收集上清液;(3)将步骤(2)收集的上清液装入透析袋中进行透析,透析两次后截留分子量为100~1000Da的透析液,经冷冻干燥后,即得澳洲坚果抗菌活性多肽。2.根据权利要求1所述的具有抗菌活性澳洲坚果多肽的制备方法,其特征在于,步骤(3)中所述截留的分子量为100~300Da。3.根据权利要求1或2所述的具有抗菌活性澳洲坚果多肽的制备方法,其特征在于,步骤(1)中所述乙醇浸提的步骤为:将澳洲坚果粕粉碎,过60目筛,然后向其中加入体积分数60%的乙醇溶液,充分混匀后置于恒温水浴中浸提1h,然后加热煮沸至无乙醇味。4.根据权利要求3所述的具有抗菌活性澳洲坚果多肽的制备方法,其特征在于,所述恒温水浴的温度为55~60℃,待煮沸除去乙醇后,冷却至酶解所需温度。5.根据权利要求3所述的具有抗菌活性澳洲坚果多肽的制备方法,其特征在于,所述澳洲坚果粕与乙醇溶液的料液比为1:5g/mL。6.根据权利要求1或2所述的具有抗菌活性澳洲坚果多肽的制备方法,其特征在于,所述冷榨脱脂的操作为:将澳洲坚果果仁在20~25℃、压力45~55MPa下压榨50~60min。7.根据权利要求1或2所述的具有抗菌活性澳洲坚果多肽的制备方法,其特征在于,所述灭酶处理的条件为:加热酶解液至85℃以上灭酶5~10min。8.根据权利要求1或2所述的具有抗菌活性澳洲坚果多肽的制备方法,其特征在于,步骤(2)中所述两次离心的条件均为:于4000r/min离心10min。9.根据权利要求1或2所述的具有抗菌活性澳洲坚果多肽的制备方法,其特征在于,所述透析时,将第一次透析后的袋外液体通过旋转蒸发仪富集,温度为54℃,真空泵压力为90bar,转速为140r/min。10.根据权利要求1或2所述的具有抗菌活性澳洲坚果多肽的制备方法,其特征在于,所述透析袋使用前经过煮沸处理10min。2CN108728508A说明书1/8页一种具有抗菌活性澳洲坚果多肽的制备方法技术领域[0001]本发明属于植物多肽制备技术领域,具体涉及一种具有抗菌活性澳洲坚果多肽的制备方法。背景技术[0002]澳洲坚果(Macadamiaspp.),又名昆士兰栗、夏威夷果、巴布果、澳洲胡桃等,是山龙眼科(Proteaceae)澳洲坚果属(MacadamiaF.Muell)多年生常绿果树,原产于澳大利亚昆士兰东南部和新西兰威尔士东北部(南纬25~29°)的亚热带森林,是世界著名的坚果。澳洲坚果从20世纪70年代开始引入中国,云南自1981年开始引种,1996年开始生产性规模种植,至2017年底全省种植面积已达260多万亩。澳洲坚果可食部分为果仁,含油量高、营养丰富、可生吃,烤制后酥脆可口,质地细腻,带有奶油清香,风味极佳,经济价值高,在国际市场上深受青睐,被誉为“坚果之王”。随着《云南省澳洲坚果产业规划(2013—2020)》的实施,我国澳洲坚果壳果产量有望达到100万t/年,澳洲坚果油将成为重要的产品形式。澳洲坚