一种大蒜中多种生物活性成分的集成提取方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109402073A(43)申请公布日2019.03.01(21)申请号201810277164.7(22)申请日2018.03.31(71)申请人大连豪翔生物酶工程有限公司地址116000辽宁省大连市中山区鲁迅路4号(72)发明人黄祥贤续彦龙(74)专利代理机构大连至诚专利代理事务所(特殊普通合伙)21242代理人杨威涂文诗(51)Int.Cl.C12N9/02(2006.01)C12P21/06(2006.01)C08B37/00(2006.01)C07C315/06(2006.01)C07C317/48(2006.01)权利要求书2页说明书5页附图1页(54)发明名称一种大蒜中多种生物活性成分的集成提取方法(57)摘要本发明公开了一种大蒜中多种生物活性成分的集成提取方法，包括步骤：S1.大蒜预处理；S2.第一次固液分离：卧螺分离机分离得到液相和固相酶解底物；S3.SOD的制备：液相第一次膜分离截留液提取、精制SOD；S4.大蒜多糖的制备：第二次膜分离截留液提取、精制大蒜多糖；S5.蒜氨酸的制备：第二次膜分离透过液提取、精制蒜氨酸；S6.酶解过程：固相酶解底物加水调配后用复合蛋白酶酶解后灭酶，得到酶解产物；S7.第二次固液分离：卧螺分离机分离得到大蒜低聚肽液和固相；S8.无臭蒜粉的制备：固相制得无臭蒜粉；S9.大蒜低聚肽的制备：大蒜低聚肽液浓缩、精制大蒜低聚肽。本发明可以充分利用大蒜资源，避免资源浪费。CN109402073ACN109402073A权利要求书1/2页1.一种大蒜中多种生物活性成分的集成提取方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.大蒜预处理：将大蒜剥皮后清洗，得到的蒜瓣于55～65℃条件下热处理20min灭活其中的蒜酶，防止蒜臭味的产生，随后迅速冷却至0～5℃条件，将蒜瓣搅碎，添加适量预先冷藏于4℃的0.5MNaCl溶液用胶体磨磨浆、高压均质破壁处理，再添加0.5MNaCl溶液将蛋白质等盐析沉淀，直至固含量为7～15％，搅拌提取8～12h，得混合提取料液；S2.第一次固液分离：将所述步骤S1中得的混合提取料液通过卧螺分离机分离得到液相和固相酶解底物；S3.SOD的制备：将所述步骤S2中得到的液相通过孔径为20000Da的陶瓷膜，透过液备用，收集截留液，通过丙酮沉淀分离后冷冻干燥得到SOD；S4.大蒜多糖的制备：将所述步骤S3中第一次膜分离得到的透过液通过孔径为5000Da的有机膜，透过液备用，收集截留液，经脱色、减压浓缩后冷冻干燥制得大蒜多糖；S5.蒜氨酸的制备：将所述步骤S4中第二次膜分离得到的透过液经减压浓缩至固含量为15％～30％，再经沉淀分离后用水溶解，乙醇重结晶，分离后冷冻干燥制得蒜氨酸；S6.酶解过程：将所述步骤S1中得到的固相酶解底物经检测蛋白质含量，然后加水调配至固含量为10％～30％，调节料液pH为7～8.5。加入复合蛋白酶，以料液中的蛋白质重量为100％计，所述复合蛋白酶的加入量为1.0～5.0％，于40～50℃条件下酶解2～5h，调节酶解后料液的pH为5.5～6.5，于70～90℃灭酶得到大蒜酶解产物；S7.第二次固液分离：将所述步骤S6中得到的酶解产物经卧螺分离机分离得到大蒜低聚肽液和固相；S8.无臭蒜粉的制备：将所述步骤S7中得到的固相经干燥、粉碎后制得无臭蒜粉；S9.大蒜低聚肽的制备：将所述步骤S7中得到的大蒜低聚肽液经絮凝后，取液相经脱色、脱腥等过程，再将精制液通过有机膜浓缩和减压浓缩装置，喷雾干燥制得大蒜低聚肽。2.根据权利要求1中所述的一种大蒜中多种生物活性成分的集成提取方法，其特征在于，步骤S3中SOD的沉淀分离包括将得到的SOD截留液按体积比1：1～1.2添加丙酮试剂，搅拌均匀后于0～5℃静置分离。3.根据权利要求1中所述的一种大蒜中多种生物活性成分的集成提取方法，其特征在于，步骤S5中蒜氨酸的沉淀分离包括将浓缩液添加95％的乙醇至含醇量为40％～60％，调pH5.5～6.5，静置分离10～24h。4.根据权利要求1中所述的一种大蒜中多种生物活性成分的集成提取方法，其特征在于，所述复合蛋白酶至少包括AS1.398中性蛋白酶、2709碱性蛋白酶、胰蛋白酶和菠萝蛋白酶。5.根据权利要求4中所述的一种大蒜中多种生物活性成分的集成提取方法，其特征在于，所述AS1.398中性蛋白酶、2709碱性蛋白酶、胰蛋白酶和菠萝蛋白酶的重量比为1:(0.3～3):(0.15～2):(0.08～1.5)。6.根据权利要求1中所述的一种大蒜中多种生物活性成分集成提取的方法，其特征在于，步骤S4和S9中，所述脱色处理使用活性炭柱过滤。7.根据权利要求1中所述的一种大蒜中多种生物活性成分集成提取的方法，其特征在于，步骤S9中