益母草膏的指纹图谱检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109655565A(43)申请公布日2019.04.19(21)申请号201910010878.6G01N30/32(2006.01)(22)申请日2019.01.07G01N30/06(2006.01)G01N30/02(2006.01)(71)申请人南京海昌中药集团有限公司地址210061江苏省南京市高新开发区软件园2号研发楼B座1-3层申请人江苏海昇药业有限公司(72)发明人蔡宝昌李国维金俊杰孙戡平郑艳萍陈海超(74)专利代理机构南京经纬专利商标代理有限公司32200代理人杨海军(51)Int.Cl.G01N30/86(2006.01)G01N30/74(2006.01)G01N30/34(2006.01)权利要求书2页说明书5页附图1页(54)发明名称益母草膏的指纹图谱检测方法(57)摘要本发明公开了益母草膏的指纹图谱检测方法，该方法包括以下步骤：步骤1、益母草膏供试品溶液的制备；步骤2、混合对照品溶液的制备：步骤3、分别精密吸取供试品溶液和混合对照品溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图；步骤4，将步骤3中获得的益母草指纹图谱仪器导出，并导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，选择不同批次益母草的色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰；用平均值计算法生成益母草的对照指纹图谱；计算各共有峰的相对保留时间、相对峰面积。本发明所提供的益母草指纹图谱，能全面，客观地表征益母草的质量。本发明提供的指纹图谱的检测方法具有方法简便、稳定、精密度高、重现性好等优点。CN109655565ACN109655565A权利要求书1/2页1.一种益母草膏的指纹图谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、益母草膏供试品溶液的制备：取益母草膏，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入含0.5％体积盐酸的甲醇，密塞，称定质量，超声处理，放冷，用含0.5％体积盐酸的甲醇补足减失的重量，静置，上清液用0.45μm有机微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；步骤2、混合对照品溶液的制备：分别取盐酸水苏碱、盐酸益母草碱、槲皮素和芦丁对照品适量，精密称定，置于容量瓶中，加甲醇配成混合对照品溶液，置4℃冰箱备用；步骤3、分别精密吸取步骤1的供试品溶液和步骤2的混合对照品溶液，注入高效液相色谱仪，记录色谱图；步骤4，将步骤3中获得的益母草膏供试品溶液的指纹图谱导出，并导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A；选择不同批次益母草膏的色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰；用平均值计算法生成益母草膏的对照指纹图谱，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积；并根据混合对照品溶液色谱图的保留时间标注对照指纹图谱中峰的化学成分。2.根据权利要求1所述的一种益母草膏的指纹图谱检测方法，其特征在于，步骤1益母草膏供试品溶液的制备方法为：精密称取益母草膏1.0g，置150ml具塞锥形瓶中，精密加入含0.5％体积盐酸的甲醇15～50ml，密塞，称定质量，超声处理15～45min，放冷，用含0.5％体积盐酸的甲醇补足减失的重量，静置2h，上清液用0.45μm有机微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。3.根据权利要求1所述的一种益母草膏的指纹图谱检测方法，其特征在于，步骤2混合对照品溶液的制备方法为：分别取盐酸水苏碱、盐酸益母草碱、槲皮素和芦丁对照品适量，精密称定，置于10ml容量瓶中，加甲醇配成浓度分别为425μg/ml、387μg/ml、447μg/ml、469μg/ml的对照品储备液，置4℃冰箱备用。然后分别精密吸取上述对照品溶液适量加甲醇定容至10ml，制成每1ml含盐酸水苏碱、盐酸益母草碱、槲皮素和芦丁为42.5μg、38.7μg、44.7μg、46.9μg的混合对照品溶液。4.根据权利要求1所述的一种益母草膏的指纹图谱检测方法，其特征在于，步骤3高效液相色谱仪检测的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以含0.1％磷酸体积的水作为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱，流速为0.5～1.5ml·min-1，柱温25～40℃，检测波长200～360nm。5.根据权利要求4所述的一种益母草膏的指纹图谱检测方法，其特征在于，梯度洗脱如下表：2CN109655565A权利要求书2/2页6.根据权利要求4所述的一种益母草膏的指纹图谱检测方法，其特征在于，色谱柱为PurospherSTARLPRP-18endcapped，规格为4.6*250mm，5μm。7.根据权利要求4所述的一种益母草膏的指纹图谱检测方法，其特征在于，得到的益母草膏指纹图谱中有9个共有峰，各共有峰的保留时间分别为：共有峰1：20.073min；共有峰2：22.414min；共有峰3：25.407min；共有峰4：27.323min；共有峰5：31.673min；共有