一种人源的脱细胞真皮基质的制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109675112A(43)申请公布日2019.04.26(21)申请号201910134091.0(22)申请日2019.02.22(71)申请人上海仁康科技有限公司地址201900上海市宝山区真陈路1000号1幢6楼K座211室(72)发明人董亚兵朱宁文朱迎春(74)专利代理机构北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙)11465代理人李冉(51)Int.Cl.A61L27/36(2006.01)A61L27/60(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图4页(54)发明名称一种人源的脱细胞真皮基质的制备方法(57)摘要本发明公开了一种人源的脱细胞真皮基质的制备方法，具体步骤如下：取储存的人源皮肤；清除皮下附带脂肪成分；用碘伏及酒精清洗消毒，后用低渗溶液反复浸泡清洗皮肤；用DispaseII溶液处理过夜；去除表皮，后用生理盐水清洗，获得真皮；用高渗盐溶液处理；用生理盐水清洗；用脱细胞液在透析装置中处理，获得脱细胞真皮基质；用生理盐水清洗，得到人源的脱细胞真皮基质。本发明的制备方法简便，生产工艺简单可靠，提高生产效率，节约生产成本，可以最大程度减轻环境污染，同时获得的脱细胞真皮基质保留了皮肤基底膜，更利于细胞黏附增殖，同时脱细胞真皮含有丰富的生长因子，具有良好的生物相容性，更有利于支持细胞的生长。CN109675112ACN109675112A权利要求书1/1页1.一种人源的脱细胞真皮基质的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)取储存的人源皮肤；(2)清除皮下附带脂肪成分；(3)将步骤(2)清除皮下附带脂肪成分的皮肤，用碘伏及酒精清洗消毒，后用低渗溶液反复浸泡清洗皮肤；(4)将步骤(3)清洗后的皮肤用2.5mg/mlDispaseII溶液处理过夜；(5)弃去DispaseII溶液，去除表皮，后用生理盐水清洗，获得真皮；(6)将步骤(5)获得的真皮用含有Ca2+的高渗盐溶液处理12-24h；(7)弃去高渗盐溶液后，用生理盐水清洗；(8)将步骤(7)清洗后的真皮置于配制好的“脱细胞液”中，在“透析装置”中处理2h-6h，获得脱细胞真皮基质；(9)将步骤(8)获得的脱细胞真皮基质用生理盐水清洗3次，每次15min，得到人源的脱细胞真皮基质。2.根据权利要求1所述的一种人源的脱细胞真皮基质的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)，将步骤(2)清除皮下附带脂肪成分的皮肤，用2％碘伏清洗消毒，用75％酒精脱碘，再用无菌蒸馏水反复浸泡清洗皮肤。3.根据权利要求1所述的一种人源的脱细胞真皮基质的制备方法，其特征在于，所述步骤(6)，将步骤(5)获得的真皮用0.5-3mol/L含有Ca2+的高渗盐溶液处理12-24h，Ca2+的终浓度为1-10mM/L。4.根据权利要求3所述的一种人源的脱细胞真皮基质的制备方法，其特征在于，所述高渗盐溶液为0.5-3mol/L含有Ca2+的氯化钠溶液，Ca2+的终浓度为1-10mM/L。5.根据权利要求1所述的一种人源的脱细胞真皮基质的制备方法，其特征在于，步骤(8)所述的“脱细胞液”包含以下组分：0.1％-0.5wt％胰酶，0.5-5mMEDTA，0.1％-0.5wt％+-2+2+-TritonX-100，Na0.1-0.5mol/L，Cl0.1-0.5mol/L，Ca1-10mmol/L；Ca来自Ca(NO3)2，NO32-20mmol/L。6.根据权利要求1所述的一种人源的脱细胞真皮基质的制备方法，其特征在于，步骤(8)所述的“脱细胞液”包含以下组分：0.1％-0.5wt％胰酶，0.5-5mMEDTA，0.1％-0.5wt％+-2+2+TritonX-100，Na0.1-0.5mol/L，Cl0.1-0.6mol/L，Ca1-10mmol/L；Ca来自CaCl2。2CN109675112A说明书1/5页一种人源的脱细胞真皮基质的制备方法技术领域[0001]本发明涉及医疗材料技术领域，更具体的说是涉及一种人源的脱细胞真皮基质的制备方法。背景技术[0002]真皮替代物在创面愈合过程中具有重要作用，能够在创面底部提供真皮支架，提高培养表皮膜片的成活率，减小创面收缩和瘢痕形成。对于大面积烧伤或者创伤的病人来说，皮肤移植是最好的治疗方法。脱细胞真皮基质(ADM)具有与皮肤真皮近似的内在结构，作为真皮替代物在国内外实验、临床中均得到应用。[0003]目前脱细胞真皮基质主要分为两类：异体脱细胞真皮基质和异种的脱细胞真皮基质。相比异种的脱细胞真皮基质，实践和临床的使用证实，来源于人的尸体皮制作的同种异体脱细胞真皮作为真皮替代物最为理想，其机械性能与正常皮肤接近，组织相容性较好，免疫排斥反应较小，更适合皮肤缺损的修复。[0004]脱细