一种猪皮脱细胞真皮基质敷料的制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109550075A(43)申请公布日2019.04.02(21)申请号201811379737.3(22)申请日2018.11.20(71)申请人江阴奔翔生物科技有限公司地址214400江苏省无锡市江阴市新澄路3号(72)发明人黄盛丛亮亮刘汝诚(74)专利代理机构江阴市永兴专利事务所(普通合伙)32240代理人彭春艳(51)Int.Cl.A61L26/00(2006.01)A61L27/36(2006.01)A61L27/60(2006.01)权利要求书2页说明书6页附图1页(54)发明名称一种猪皮脱细胞真皮基质敷料的制备方法(57)摘要本发明公开了一种猪皮脱细胞真皮基质敷料的制备方法，其特点是利用物理、化学及生化方法，以及冷冻干燥技术，在保持猪皮的三维立体网状构造不变的前提下，通过脱脂、脱毛、碱处理病毒灭活、脱细胞、交联、后处理、辐照灭菌等有效地彻底清除猪皮中的抗原物质，完整地保留了真皮细胞外基质的形态，提升了材料的物理强度、亲水性、适当的降解性及存储稳定等性能。CN109550075ACN109550075A权利要求书1/2页1.猪皮脱细胞真皮基质敷料的制备方法,包含如下步骤，其中所述原辅材料的用量％除特殊说明外，均表示为被处理的称重皮的重量百分数，即原辅材料重量＝被处理的称重皮重×百分数：(1)选取检疫合格的生态猪，经屠宰剥皮后，修剪边缘，去除多余浮肉，至油窝显露为止；(2)充分用水清洗，沥干后称重，在正反面涂抹食盐进行防腐，初步破坏细胞，包装后将其置于冰柜中保藏，然后对这些皮在转鼓中依次进行后续工艺处理；(3)浸水清洗；(4)使用脱脂剂进行化学脱脂；(5)使用脱毛酶进行酶脱毛，并进行碱处理；(6)使用生化胰酶进行脱细胞处理；(7)交联改性：配制150～200％pH＝10～11的NaHCO3-NaOH缓冲液；设置转鼓温度35～40℃，加入缓冲液50～100％，匀速转动10～30min，排尽；加入缓冲液100％，GPE5～20％，三乙醇胺1～3％，匀速转动24～72h；在交联液中加入甘氨酸0.1～2％，匀速转动30～90min,控干废液；(8)后处理；再使用纯化水100～300％闷洗10～30min2～3次，控干；设置转鼓温度30～32℃，加入纯化水100％，NH4Cl1～3％，平平加0.5～3％，匀速转动40～60min，至废液pH值为7.0～7.5控干废液；再使用纯化水100～300％闷洗10～30min2～3次，控干；设置转鼓温度32～36℃，加入纯化水100％，甘氨酸0.1～2％，匀速转动30～90min,控干废液，用纯化水100～300％闷洗10～30min2～3次后重复添加甘氨酸1次；(9)末道清洗，保湿；(10)冻干成型：将材料送至冷冻干燥机中冻干8～24h；设置恒温恒湿箱温度30～38℃，湿度85～95％，回软1～4h后，在精密剖层机上剖出厚度0.3～1.0mm的材料；按尺寸要求进行分割，或在激光机上打上圆孔或网孔；(11)包装灭菌：将产品包装好，并使用钴60所产生的γ射线辐照灭菌。2.根据权利要求1所述猪皮脱细胞真皮基质敷料的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，原料猪皮应为新鲜的，无重大疾病或传染病史的猪皮，如屠宰后4h内能送达生产现场则按冷却形式即温度控制为0～3℃运输，不能送达的进行盐腌防腐后并使用按冻结形式即温度控制为不低于-15℃冷链运输。3.根据权利要求1所述猪皮脱细胞真皮基质敷料的制备方法，其特征在于，所使用的转鼓为不锈钢恒温控速转鼓。4.根据权利要求1所述猪皮脱细胞真皮基质敷料的制备方法，其特征在于，所述脱脂剂主要成分是十二烷基苯磺酸钠，脱毛酶是指胰蛋白酶和AS1.398中性蛋白酶按比例混合。5.根据权利要求1所述猪皮脱细胞真皮基质敷料的制备方法，其特征在于交联剂GPE是指丙三醇缩水甘油醚(662)。6.根据权利要求1所述猪皮脱细胞真皮基质敷料的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中，使用脱脂剂进行化学脱脂的工艺具体是：设置转鼓温度30～32℃，加入水150％，平平加1～3％，脱脂剂1～5％，匀速转动60～120min，控干废液，并使用水闷洗10～15min排尽废液2次，上述过程反复3次。2CN109550075A权利要求书2/2页7.根据权利要求1所述猪皮脱细胞真皮基质敷料的制备方法，其特征在于，所述步骤(5)中，使用脱毛酶进行酶脱毛，并进行碱处理的工艺具体是：沥干水分，将脱毛酶5～10％，均匀的涂抹于皮张的肉面上，出水后肉面对肉面放置于25～30℃恒温室中8～24h；推去皮上的针毛和绒毛后流水冲洗10～15min；加入水30％，Na2S0.5～2％，NaOH0.5～1.5％，匀速转动60～90min，待毛