乳铁蛋白/白蛋白融合蛋白质及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110114460A(43)申请公布日2019.08.09(21)申请号201780081124.9(51)Int.Cl.(22)申请日2017.10.27C12N15/09(2006.01)A61P43/00(2006.01)(30)优先权数据A01K67/027(2006.01)2016-2120772016.10.28JPA61K38/38(2006.01)2017-0448932017.03.09JPA61K38/40(2006.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日A61P9/10(2006.01)2019.06.27A61P35/00(2006.01)(86)PCT国际申请的申请数据A61P39/04(2006.01)PCT/JP2017/0388662017.10.27C07K14/765(2006.01)C07K14/79(2006.01)(87)PCT国际申请的公布数据C07K19/00(2006.01)WO2018/079702JA2018.05.03C12N1/15(2006.01)(71)申请人NRL制药股份有限公司C12N1/19(2006.01)地址日本神奈川县C12N1/21(2006.01)(72)发明人佐藤淳加贺谷伸治C12N5/10(2006.01)C12P21/02(2006.01)(74)专利代理机构隆天知识产权代理有限公司72003权利要求书1页说明书94页代理人陈曦向勇序列表31页附图9页(54)发明名称乳铁蛋白/白蛋白融合蛋白质及其制备方法(57)摘要本发明提供一种临床应用效果高的乳铁蛋白融合蛋白质及其制备方法等。进而，本发明还提供一种保留天然乳铁蛋白的生物活性、显著延长在体内的寿命、临床应用效果优于天然乳铁蛋白和基因重组型乳铁蛋白的乳铁蛋白融合蛋白质及其制备方法等。本发明的融合蛋白质的变异体保留着乳铁蛋白具有的铁的结合能力，因此，至少保留着基于铁结合能力的乳铁蛋白的重要的生物活性。另外，由于具有生物学利用能力、对蛋白酶的抵抗性，因此能够在体内长时间地发挥生物活性。此外，本发明的融合蛋白质具有在胃中难以受到胃蛋白酶引起的消化分解的特征。CN110114460ACN110114460A权利要求书1/1页1.一种融合蛋白质或其变异体，其中，该融合蛋白质是由(1)人血清白蛋白HSA或者人血清白蛋白的片断或肽与(2)乳铁蛋白或者乳铁蛋白的生物活性片断或肽形成的融合蛋白质，并且，以(LF-s-Y)n或(Y-s-LF)n来表示，式中，LF表示乳铁蛋白或者乳铁蛋白的生物活性片断或肽，Y表示人血清白蛋白或者含有人血清白蛋白的片断的蛋白质或肽，s表示0～10个任意氨基酸的序列，n表示1～10的整数。2.如权利要求1所述的融合蛋白质或其变异体，其中，其以(LF-s-Y)n来表示。3.如权利要求1所述的融合蛋白质或其变异体，其中，其以(Y-s-LF)n来表示。4.如权利要求1所述的融合蛋白质或其变异体，其中，含有序列号7所示的氨基酸序列。5.如权利要求1所述的融合蛋白质或其变异体，其中，含有序列号14所示的氨基酸序列。6.如权利要求1至5中任一项所述的融合蛋白质或其变异体，其中，所述融合蛋白质或其变异体保留着天然乳铁蛋白或基因重组型乳铁蛋白的50％以上的铁螯合能力。7.如权利要求1至6中任一项所述的融合蛋白质或其变异体，其中，所述融合蛋白质或其变异体是以选自于由乳铁蛋白受体和白蛋白受体所构成的组中的至少一种受体为介而被摄取入细胞。8.如权利要求1至7中任一项所述的融合蛋白质或其变异体，其中，所述融合蛋白质或其变异体与天然乳铁蛋白或基因重组型乳铁蛋白相比，提高了对胃蛋白酶的耐受性。9.一种核酸分子，其中，其编码权利要求1至8中任一项所述的融合蛋白质或其变异体。10.一种表达载体，其中，其含有权利要求9所述的核酸分子。11.一种宿主细胞，其中，其含有权利要求10所述的表达载体。12.一种非人基因重组动物，其中，其含有权利要求9所述的核酸分子。13.一种治疗剂，其中，其是基于权利要求1至8中任一项所述的融合蛋白质或其变异体得以改善的疾病的治疗剂。14.一种医药组合物，其中，其含有权利要求1至8中任一项所述的融合蛋白质或其变异体、以及载体。15.如权利要求14所述的医药组合物，其中，其用于肿瘤的治疗。16.如权利要求15所述的医药组合物，其中，所述肿瘤为肺癌。17.一种权利要求1至8中任一项所述的融合蛋白质或其变异体的制备方法，其中，其包括：针对含有编码该融合蛋白质或其变异体的基因的宿主细胞进行培养，使融合蛋白质表达，并从该宿主细胞或其培养基中回收融合蛋白质或其变异体。2CN110114460A说明书1/94页乳铁蛋白/白蛋白融合