一种外泌体缓释体系及其构建方法与应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110123842A(43)申请公布日2019.08.16(21)申请号201810136419.8A61K47/42(2017.01)(22)申请日2018.02.09A61K47/38(2006.01)A61K9/08(2006.01)(71)申请人上海市第六人民医院A61K9/06(2006.01)地址200233上海市徐汇区宜山路600号A61K9/70(2006.01)申请人汪泱A61P19/02(2006.01)(72)发明人杨云龙汪泱A61P17/00(2006.01)(74)专利代理机构上海科盛知识产权代理有限A61P21/00(2006.01)公司31225A61P19/04(2006.01)代理人褚明伟A61P29/00(2006.01)A61P9/10(2006.01)(51)Int.Cl.A61P35/00(2006.01)A61K35/545(2015.01)A61L27/38(2006.01)A61K35/28(2015.01)A61L27/20(2006.01)A61K35/15(2015.01)A61L27/22(2006.01)A61K35/13(2015.01)A61L27/60(2006.01)A61K31/337(2006.01)A61K47/36(2006.01)权利要求书2页说明书9页附图4页(54)发明名称一种外泌体缓释体系及其构建方法与应用(57)摘要本发明涉及一种基于透明质酸与膜蛋白CD44结合作用实现CD44阳性外泌体缓释的外泌体体系及其构建方法与应用。本发明将CD44阳性外泌体有效的结合到由透明质酸构建的材料中，进而实现外泌体的长久释放。本发明提供的方法可以有效解决外泌体在体内驻留时间短的问题，提高外泌体的治疗效率。CN110123842ACN110123842A权利要求书1/2页1.一种外泌体缓释体系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1)、分离提取CD44阳性外泌体，并与生物相容性介质混合，制备成外泌体悬液；2)、将透明质酸或透明质酸修饰物溶解于生物相容性介质中；3)、将步骤1)与步骤2)中的溶液充分混合均匀；4)、利用步骤3)中的混合溶液制备负载CD44阳性外泌体的缓释体系，所述缓释体系包括溶液、水凝胶、多孔支架或者膜材。2.根据权利要求1所述的一种外泌体缓释体系的构建方法，其特征在于，所述CD44阳性外泌体包括干细胞来源外泌体、树突细胞来源外泌体、肿瘤细胞来源外泌体。3.根据权利要求1所述的一种外泌体缓释体系的构建方法，其特征在于，所述CD44阳性外泌体在外泌体悬液中的浓度范围为1×105/mL–1×1013/mL，优选为1×1010/mL–1×1012/mL。4.根据权利要求1所述的一种外泌体缓释体系的构建方法，其特征在于，所述透明质酸修饰物选自以下物质中的一种或几种：丙烯酸酯类基团修饰的透明质酸、甲基丙烯酸酯类基团修饰的透明质酸、端基功能化聚乙二醇修饰的透明质酸、氧化多醛基透明质酸、邻苯二酚类基团修饰的透明质酸、氨基衍生物修饰的透明质酸、巯基衍生物修饰的透明质酸、马来酰亚胺衍生物修饰的透明质酸。5.根据权利要求1所述的一种外泌体缓释体系的构建方法，其特征在于，所述缓释体系为溶液时，制备负载CD44阳性外泌体的缓释溶液的具体方法为：将步骤1)与步骤2)中的溶液充分混合均匀，得到透明质酸溶液。其中，透明质酸或明质酸修饰物的浓度范围为0.001％-20％，优选为0.1％-8％。6.根据权利要求1所述的一种外泌体缓释体系的构建方法，其特征在于，所述缓释体系为负载CD44阳性外泌体的缓释光交联水凝胶时，其制备方法为：将透明质酸修饰物与光引发剂充分溶解于生物相容性介质中，然后与外泌体悬液充分混合，利用光源照射，制备负载CD44阳性外泌体的缓释光交联水凝胶；透明质酸修饰物主要包括丙烯酸酯类基团修饰的透明质酸、甲基丙烯酸酯类基团修饰的透明质酸；透明质酸修饰物的浓度范围为0.5％-10％，优选为2％-5％；光引发剂包括I2959、TPO或EosinY，其对应的激发波长分别为365nm，365nm，524nm；光源照射时间范围为10s–30min，优选为1min–10min。7.根据权利要求6所述的一种外泌体缓释体系的构建方法，其特征在于，所述缓释体系为负载CD44阳性外泌体的缓释原位注射水凝胶时，其具体方法为：将透明质酸修饰物溶解于生物相容性介质中，并与CD44阳性外泌体悬液充分混合；将水凝胶的另一组分溶液溶解于相同的生物相容性介质中，将两组溶液分别加入到双组份注射器的针筒中，进行注射成型，即得到负载CD44阳性外泌体的缓释原位注射水凝胶；透明质酸修饰物包括：A、氧化多醛基透明质酸，其对应的另一组分包