一种丙谷二肽的分离提纯方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110407914A(43)申请公布日2019.11.05(21)申请号201910421372.4(22)申请日2019.05.21(66)本国优先权数据201810596223.72018.06.11CN(71)申请人合肥川迪医药技术有限公司地址230000安徽省合肥市高新区天智路5号同创科技园七号楼202室(72)发明人秦川(51)Int.Cl.C07K5/062(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图15页(54)发明名称一种丙谷二肽的分离提纯方法(57)摘要本发明公开了一种丙谷二肽的分离提纯方法，包括陶瓷膜过滤除酶；将丙谷二肽酶反应液通过陶瓷膜过滤设备过滤，脱除反应液中残留的酶蛋白，得陶瓷膜透析液；采用电渗析的方法脱盐：陶瓷膜过滤液进入电渗析设备进行脱盐，把丙谷二肽和无机盐进行分离，得丙谷二肽溶液；采用反渗透膜设备浓缩：脱盐后的丙谷二肽溶液进入反渗透设备进行浓缩，得原体积的30-40%的浓缩液；采用减压浓缩的设备对上步的浓缩液进行进一步的浓缩至反渗透原体积的45%；析晶：上步的浓缩液加入3倍量的甲醇析晶，得粗品；多肽杂质去除纯化：粗品溶解于3倍量的水中，再加入0.1-50%的酸性物质，30-80℃加热搅拌，加入6倍水量的甲醇析晶，65℃减压干燥得纯化的精制品，纯度大于99.7%；单个杂质小于0.1%。CN110407914ACN110407914A权利要求书1/1页1.一种丙谷二肽的分离提纯方法，其特征在于，包括以下步骤：将陶瓷膜过滤除酶；然后将丙谷二肽酶反应液通过陶瓷膜过滤设备过滤，脱除反应液中残留的酶蛋白，得陶瓷膜透析液；采用电渗析的方法脱盐：将陶瓷膜过滤液进入电渗析设备进行脱盐，把丙谷二肽和无机盐进行分离，得丙谷二肽溶液；采用反渗透膜设备浓缩：将脱盐后的丙谷二肽溶液进入反渗透设备进行浓缩，得原体积的30-40%的浓缩液；采用减压浓缩的设备对上步的浓缩液进行进一步的浓缩至反渗透原体积45%；析晶：将上步的浓缩液加入3倍量的甲醇析晶，得粗品；多肽杂质去除纯化：将粗品溶解于3倍量的水中，再加入0.1-50%的酸性物质，30-80℃加热搅拌，加入6倍水量的甲醇析晶得纯化的精制品，纯度大于99.7%；单个杂质小于0.1%。2.根据权利要求1所述的一种丙谷二肽的分离提纯方法，其特征在于，所述陶瓷膜过滤设备采用的陶瓷膜的孔径为10-100nm，其中，温度为10-60℃之间，压力为0.15-0.5Mpa。3.根据权利要求1所述的一种丙谷二肽的分离提纯方法，其特征在于，所述减压浓缩是温度控制在30-80℃，优选50-65℃；减压浓缩至反渗透原体积45%。4.根据权利要求1所述的一种丙谷二肽的分离提纯方法，其特征在于，所述析晶是控制甲醇的加入量为加入水量的1-10倍；优选4-6倍。5.根据权利要求4所述的一种丙谷二肽的分离提纯方法，其特征在于，所述析晶是控制甲醇的加入量为3-5倍。6.根据权利要求1所述的一种丙谷二肽的分离提纯方法，其特征在于，所述纯化是加水溶解粗品的水的加入量为粗品质量的0.1-10倍，加入的酸性物质为无机酸（如盐酸、硫酸等）和有机酸（如一元羧酸甲酸、二元羧酸草酸、三元羧酸柠檬酸等，及其它多元羧酸）及它们的复合酸以及酸性氧化物（如SO2）、酸式盐（如NaHSO4）；其加入的量为所需纯化物质量的0.1%-50%。7.根据权利要求6所述的一种丙谷二肽的分离提纯方法，其特征在于，所述纯化是加水溶解粗品的水的加入量为粗品质量的2-5倍；加入的酸性物质为柠檬酸、盐酸和硫酸；其加入的量为所需纯化物质量的1-5％。2CN110407914A说明书1/5页一种丙谷二肽的分离提纯方法技术领域[0001]本发明涉及丙谷二肽的生产技术领域，具体来说，涉及一种丙谷二肽的分离提纯方法。背景技术[0002]丙谷二肽，学名N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺，是L-谷氨酰胺的一种改性化合物，相对分子质量为217.22，易溶于水。L-谷氨酰胺是机体内含量非常丰富的一种氨基酸，是人体多种组织代谢的参与体，人体缺乏L-谷氨酰胺会引发多种疾病。由于L-谷氨酰胺溶解度低且不稳定，因此L-谷氨酰胺的肠外应用受到了限制。丙谷二肽可在体内分解为L-谷氨酰胺和L-丙氨酸，这一特性使经由肠外营养输液补充L-谷氨酰胺成为可能。丙谷二肽分解释放出的氨基酸作为营养物质各自储存在身体的相应部位并随机体的需要进行代谢。[0003]由于丙谷二肽药用价值的特殊性，就像生理盐水、葡萄糖一样，将成为救护病人的必需品。而目前工业上制造丙谷二肽的方法主要有化学合成法和酶促合成法。由于化学合成法合成路线长，过程控制点要求高，收率低，因此酶促合成法逐渐成为工业化生产的主要方法。通过酶促合成法得到的丙谷二肽