高纯度丙谷二肽的生产方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110372773A(43)申请公布日2019.10.25(21)申请号201910648854.3C07K1/14(2006.01)(22)申请日2019.07.18C12N1/16(2006.01)C12R1/74(2006.01)(83)生物保藏信息CGMCCNo.179282019.06.16(71)申请人大连医诺生物股份有限公司地址116600辽宁省大连市经济技术开发区49号(72)发明人洪皓范超刘军孙博齐佳坤吴文忠(74)专利代理机构大连格智知识产权代理有限公司21238代理人刘晓琴(51)Int.Cl.C07K5/062(2006.01)C07K1/34(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图2页(54)发明名称高纯度丙谷二肽的生产方法(57)摘要高纯度丙谷二肽的生产方法，包括对酶促丙谷二肽合成反应的反应液进行后处理的步骤，所述的后处理包括将热带假丝酵母菌突变株菌体接种入酶促丙谷二肽合成反应液中进行培养的除杂酸的步骤；所述的热带假丝酵母菌突变株的保藏编号是：CGMCCNo.17928。本发明整个过程无需添加晶种、洗晶剂，更不需要重结晶步骤，有效地简化分离纯化和精制工艺，节省生产成本；酵母可以重复利用三批次以上，并且废弃酵母可以制成饲料蛋白，没有大量的固废和废水产生，工艺绿色环保。整个生产工艺过程易控制，生产过程无污染，产品纯度高(99％以上)、收率高(95％以上)，适合大规模工业化应用。CN110372773ACN110372773A权利要求书1/1页1.高纯度丙谷二肽的生产方法，包括对酶促丙谷二肽合成反应的反应液进行后处理的步骤，其特征在于，所述的后处理包括将热带假丝酵母菌突变株菌体接种入酶促丙谷二肽合成反应液中进行培养的除杂酸的步骤；所述的热带假丝酵母菌突变株的保藏编号是：CGMCCNo.17928。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的杂酸包括L-丙氨酸和/或L-谷氨酰胺。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的除杂酸的步骤是：将酶促丙谷二肽合成反应液的pH调至6.0，接入热带假丝酵母菌突变株菌体，使初始OD＝8～12；然后于30±2℃、300～500rpm条件下培养，培养过程控制溶氧量30～50％，pH值5.5～6.0；培养结束后，离心并分别收集滤液和菌体。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的菌体重复使用。5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的后处理还包括对除杂酸步骤后所获得的滤液进行纳滤膜除盐及蒸发结晶的步骤。6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)除杂酸将酶促丙谷二肽合成反应的反应液调pH至6.0，接入热带假丝酵母菌突变株菌体，使初始OD＝10；然后于30±2℃条件下培养，培养过程控制溶氧量30～50％，pH值5.5～6.0；培养结束后，离心并分别收集滤液和菌体；(2)除盐、结晶步骤(1)所得滤液经截留分子量400Da纳滤膜除盐，减压蒸馏至大量固体析出，降温过滤，固体在50℃减压烘干得丙谷二肽纯品。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的热带假丝酵母菌突变株菌体通过下述方法制备：取一环活化的热带假丝酵母菌突变株菌体接入装有50mlYPD培养基的锥形瓶中，置于30℃、220rpm摇床中培养约16h；然后取1ml培养液接入另一盛有50mlYPD培养基的锥形瓶中，置于30℃、220rpm摇床中培养20h左右，离心收集菌体。2CN110372773A说明书1/5页高纯度丙谷二肽的生产方法背景技术[0001]丙谷二肽是一种重要的氨基酸肠外营养剂，目前主要应用在注射、粉针、水针、片剂中。微生物酶法合成丙谷二肽具有反应条件温和、环境污染少、产率高、成本低等优点，因此近年来很多企业纷纷采用α-氨基酸酯酰基转移酶制备丙谷二肽原料。[0002]α-氨基酸酯酰基转移酶合成法采用的底物为L-丙氨酸的酯类衍生物和谷氨酰胺，其中L-丙氨酸的酯类衍生物在反应体系中极易降解为L-丙氨酸(L-Ala)，因其理化性质与产物接近，从而影响产品收率和纯度。为了获得高纯度丙谷二肽，在分离提取过程中通常采用离子交换法或重结晶法对丙谷二肽粗品进行精制。CN103623777A采用活性吸附剂吸附起到脱色、除杂、去除内毒素的作用，活性吸附剂包括白炭黑30-45％、黑炭黑50-65％、离子交换树脂0.5-3％，固废和废水均较多，后续处理成本高。CN104163849A采用连续色谱分离设备进行连续色谱分离杂质和无机盐，成本较高，高纯度丙谷二肽的成本居高不下也是导致产品应用范围受限的原因之一。CN104480075A采用甲醇对丙谷二肽进行精制，产品收率在85％左右，工艺相对环保，但甲醇的添加也带来溶剂残留