一种纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110885357A(43)申请公布日2020.03.17(21)申请号201911322947.3(22)申请日2019.12.20(71)申请人大连医诺生物股份有限公司地址116600辽宁省大连市经济技术开发区49号(72)发明人李阳洪永德姜书华吴文忠(74)专利代理机构沈阳科苑专利商标代理有限公司21002代理人李颖(51)Int.Cl.C07K5/062(2006.01)C07K1/36(2006.01)C07K1/34(2006.01)C07K1/30(2006.01)权利要求书1页说明书3页(54)发明名称一种纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法(57)摘要本发明涉及丙谷二肽的分离纯化，具体的说是一种纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法。将制备丙谷二肽酶反应液依次通过陶滤除酶、纳滤除杂除盐后的浓缩液蒸发结晶，即获得纯度为98％以上的丙谷二肽。本发明纯化分离方法中采用纳滤膜除杂除盐分离效果突出，使得分离获得浓缩液中丙谷二肽含量较高、收率较高，同时大大缩短了分离时间，减少了蒸发浓缩的压力，降低能耗，产生的废水也可以通过套用提高丙谷二肽的收率，并且减少废水的生成。CN110885357ACN110885357A权利要求书1/1页1.一种纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法，其特征在于：将制备丙谷二肽酶反应液依次通过陶滤除酶、纳滤除杂除盐后的浓缩液蒸发结晶，即获得纯度为98％以上的丙谷二肽。2.按权利要求1所述的纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法，其特征在于：所述制备丙谷二肽酶反应液通过50-100nm陶瓷膜过滤除去反应液中的酶。3.按权利要求1或2所述的纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法，其特征在于：所述经陶瓷膜过滤除酶后反应液经旋转蒸发仪进行蒸发浓缩，浓缩至原质量的20％-50％，浓缩后反应液经过100-200道尔顿的纳滤膜，在压力为1.3-2.4MPa下过滤除杂质，合并每次经纳滤膜过滤除杂后的浓缩液，待用。4.按权利要求3所述的纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法，其特征在于：所述经纳滤膜过滤后浓缩液再次浓缩,所得浓缩液中固体与溶液的质量比为1:1-4，将每次再浓缩后的浓缩液合并待用。5.按权利要求4所述的纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法，其特征在于：所述每100g上述合并的浓缩液中，于30-80℃温度下滴加50-300mL的含十二烷基磺酸盐的乙醇溶液，而后以5℃-60℃/h的降温速率降温至0-20℃，过滤、洗涤滤饼，干燥后得到丙谷二肽晶体。6.按权利要求5所述的纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法，其特征在于：所述十二烷基磺酸盐为十二烷基磺酸钠、十二烷基磺酸氨或十二烷基磺酸钾。2CN110885357A说明书1/3页一种纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法技术领域[0001]本发明涉及丙谷二肽的分离纯化，具体的说是一种纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法。背景技术[0002]丙谷二肽，学名N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺，是L-谷氨酰胺的一种改性化合物，易溶于水。L-谷氨酰胺是机体内含量非常丰富的一种氨基酸，是人体多种组织代谢的参与体，人体缺乏L-谷氨酰胺会引发多种疾病。由于L-谷氨酰胺溶解度低且不稳定，因此L-谷氨酰胺的肠外应用受到了限制。丙谷二肽可在体内分解为L-谷氨酰胺和L-丙氨酸，这一特性使经由肠外营养输液补充L-谷氨酰胺成为可能。丙谷二肽分解释放出的氨基酸作为营养物质各自储存在身体的相应部位并随机体的需要进行代谢。由于丙谷二肽药用价值的特殊性，就像生理盐水、葡萄糖一样，将成为救护病人的必需品。[0003]目前生产丙谷二肽主要有化学合成法和生物酶催化法。其中化学合成法以Boc-丙氨酸或氯丙酰-谷氨酰胺为原料制备而成，此法得到的丙谷二肽纯度高，但合成路线略长；生物酶催化法具有工艺简单、条件温和、质量指标易控制、成本低等优点，更适合放大进行工业化生产。丙谷二肽的精制方法一般有浓缩蒸发结晶、溶媒结晶、离子交换树脂法、电渗析法等，其中结晶法工序多，高纯度时精制困难，步骤繁琐，离子交换树脂除盐收率极低，且产生大量含盐废水，电渗析法工艺放大困难，急需一种工艺简单、产率较高的丙谷二肽纯化方法。[0004]公布号为CN107267380A的专利公开了一种包括纳滤膜系统的丙谷二肽制备工艺系统，但其后续高纯度丙谷二肽精制仍不能达到满意效果。十二烷基磺酸盐乙醇溶液能增加体系中杂质的溶解度，提纯效果与单纯醇析结晶相比，得到的晶体纯度更高，更易分离。发明内容[0005]本发明目的在于提供一种纳滤膜和十二烷基磺酸盐析晶工艺分离纯化丙谷二肽的方法。[0006]为实现上述目的，本发明采用技术方案为：[0007]一种纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法，将制备丙谷二肽酶反应液依次通过陶滤除酶、纳滤除杂除盐后的浓缩液蒸发结晶，即获得纯度为9