一种用于非洲猪瘟病毒抗体检测的双抗原间接ELISA试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110698543A(43)申请公布日2020.01.17(21)申请号201910993746.XG01N33/569(2006.01)(22)申请日2019.10.18(71)申请人武汉科前生物股份有限公司地址430000湖北省武汉市东湖新技术开发区高新二路419号(光谷生物城)(72)发明人徐高原张华伟周明光曾小燕郝根喜安春敬朱娴静孙芳(74)专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司11002代理人商秀玲(51)Int.Cl.C07K14/01(2006.01)C12N15/34(2006.01)C12N15/70(2006.01)C12N1/21(2006.01)权利要求书1页说明书10页序列表5页附图2页(54)发明名称一种用于非洲猪瘟病毒抗体检测的双抗原间接ELISA试剂盒(57)摘要本发明涉及兽医生物技术领域，具体涉及一种用于非洲猪瘟病毒抗体检测的双抗原间接ELISA试剂盒。本发明的双抗原间接ELISA试剂盒包含利用大肠杆菌原核表达系统表达得到的非洲猪瘟病毒P30蛋白和截短的P72蛋白。该试剂盒能够有效扩大非洲猪瘟病毒抗体检测的时间范围，同时通过P72蛋白的截短、P72蛋白和P30蛋白的密码子优化、融合蛋白标签等，有效提高了蛋白的可溶表达量，最大程度保留了免疫原决定簇，极大地提高了ELISA试剂盒的特异性和灵敏度，且有效降低了试剂盒的制备成本，在非洲猪瘟病毒的早期诊断、特异性检测和流行病学调查中将发挥重要作用。CN110698543ACN110698543A权利要求书1/1页1.一种抗原组合物，其特征在于，包括非洲猪瘟病毒的P72蛋白和P30蛋白；所述P72蛋白为N端截短蛋白。2.根据权利要求1所述的抗原组合物，其特征在于，所述P72蛋白具有如下任一种氨基酸序列：(1)如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列；(2)如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的缺失、替换或插入得到的具有相同功能蛋白的氨基酸序列；和/或，所述P30蛋白具有如下任一种氨基酸序列：(1)如SEQIDNO.2所示的氨基酸序列；(2)如SEQIDNO.2所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的缺失、替换或插入得到的具有相同功能蛋白的氨基酸序列。3.根据权利要求1或2所述的抗原组合物，其特征在于，所述抗原组合物中，所述P72蛋白和所述P30蛋白的质量比为(1～3)：(1～3)。4.一种非洲猪瘟病毒抗原组合物的制备方法，其特征在于，包括：利用原核表达系统分别表达经密码子优化的非洲猪瘟病毒P72蛋白和P30蛋白的编码基因；优选地，所述原核表达系统为大肠杆菌表达系统；所述经密码子优化的非洲猪瘟病毒P72蛋白和P30蛋白的编码基因的核苷酸序列分别如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述经密码子优化的非洲猪瘟病毒P72蛋白和P30蛋白的编码基因的5’端或3’端连接有标签蛋白编码基因；优选地，所述标签蛋白编码基因为SUMO标签蛋白编码基因。6.一种重组大肠杆菌，其特征在于，包含经密码子优化的非洲猪瘟病毒P72蛋白的编码基因和/或经密码子优化的非洲猪瘟病毒P30蛋白的编码基因；所述经密码子优化的非洲猪瘟病毒P72蛋白的编码基因的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示；所述经密码子优化的非洲猪瘟病毒P30蛋白的编码基因的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示。7.权利要求1～3任一项所述的抗原组合物或权利要求4或5所述的制备方法制备得到的抗原组合物或权利要求6所述的重组大肠杆菌在制备用于检测非洲猪瘟病毒或非洲猪瘟病毒抗体的试剂或试剂盒中的应用。8.权利要求1～3任一项所述的抗原组合物或权利要求4或5所述的制备方法制备得到的抗原组合物或权利要求6所述的重组大肠杆菌在制备用于非洲猪瘟病毒检测的阳性标准品中的应用。9.权利要求1～3任一项所述的抗原组合物或权利要求4或5所述的制备方法制备得到的抗原组合物或权利要求6所述的重组大肠杆菌在制备非洲猪瘟病毒疫苗中的应用。10.一种用于非洲猪瘟病毒抗体检测的双抗原间接ELISA试剂盒，其特征在于，包含权利要求1～3任一项所述的抗原组合物，或包含由权利要求4或5所述的制备方法制备得到的抗原组合物，或包含由权利要求6所述的重组大肠杆菌表达的非洲猪瘟病毒P30蛋白和P72蛋白。2CN110698543A说明书1/10页一种用于非洲猪瘟病毒抗体检测的双抗原间接ELISA试剂盒技术领域[0001]本发明涉及兽医生物技术领域，具体涉及一种非洲猪瘟病毒的抗原组合物及其制备方法以及用于非洲猪瘟病毒抗体检测的双抗原间接ELISA试剂盒。背景技术[0002]非洲猪瘟(Africanswinefever，ASF)是由