一种检测微小残留白血病相关融合基因的引物、探针及其试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110724741A(43)申请公布日2020.01.24(21)申请号201910668942.X(22)申请日2019.07.24(71)申请人艾普拜生物科技（苏州）有限公司地址215000江苏省苏州市高新区锦峰路8号2号楼216室(72)发明人龚建于祥春高敏黄慧冯晓燕林挺(51)Int.Cl.C12Q1/6886(2018.01)权利要求书2页说明书9页序列表2页附图2页(54)发明名称一种检测微小残留白血病相关融合基因的引物、探针及其试剂盒(57)摘要本发明涉及一种检测微小残留白血病相关融合基因的引物和探针及其试剂盒。本方法利用数字PCR检测平台，在一个PCR扩增体系中加入试剂盒中核苷酸序列如SEQIDNo：1～7所示的引物和探针，并将BCR-ABL1融合基因与自对照同时扩增，即以待检基因自身作为对照，显著减少多引物多扩增所带来的信号干扰，无需标准品即可实现转录本拷贝数检测，在检测灵敏度达到0.001％的同时，检测的精密度提高了3倍以上。CN110724741ACN110724741A权利要求书1/2页1.一种检测微小残留白血病相关融合基因的引物和探针，其特征在于，所述引物和探针的核苷酸序列如SEQIDNo：1～7所示。2.根据权利要求1所述的检测微小残留白血病相关融合基因的引物和探针，其特征在于，所述引物和探针的核苷酸序列为：(1)用于检测BCR-ABL1(e13a2或e14a2)融合基因的引物和探针为：由SEQIDNo：1所示的正向引物BCR-F1，由SEQIDNo：5所示的反向引物ABL1-R，由SEQIDNo：6所示的探针P2，其中SEQIDNo：6所示的核苷酸序列的5'端有FAM标记，3'端有BHQ-MGB标记；(2)用于检测BCR-ABL1(e1a2)融合基因的引物和探针为：由SEQIDNo：2所示的正向引物BCR-F2，由SEQIDNo：5所示的反向引物ABL1-R，由SEQIDNo：6所示的探针P2，其中SEQIDNo：6所示的核苷酸序列的5'端有FAM标记，3'端有BHQ-MGB标记；(3)用于检测BCR-ABL1(e19a2)融合基因的引物和探针为：由SEQIDNo：3所示的正向引物BCR-F3，由SEQIDNo：5所示的反向引物ABL1-R，由SEQIDNo：6所示的探针P2，其中SEQIDNo：6所示的核苷酸序列的5'端有FAM标记，3'端有BHQ-MGB标记；(4)用于检测ABL1自对照基因的引物和探针为：由SEQIDNo：4所示的正向引物ABL1-F，由SEQIDNo：5所示的反向引物ABL1-R，由SEQIDNo：7所示的探针P1，其中SEQIDNo：7所示的核苷酸序列的5'端有HEX标记，3'端有BHQ-MGB标记。3.一种含有权利要求1或2任一权利要求所述检测微小残留白血病相关融合基因的引物和探针的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括核酸扩增试剂，所述的核酸扩增试剂包括：(1)检测BCR-ABL1(e13a2或e14a2)融合基因和BCR-ABL1(e1a2)融合基因和BCR-ABL1(e19a2)融合基因的数字PCR反应液，组份中的主要成份为正向引物BCR-F1、BCR-F2、BCR-F3、ABL1-F，反向引物ABL1-R，探针P1、P2以及ddH2O。(2)数字PCR预混液，组份中的主要成份为qScriptTMXLTOne-StepRT-qPCRToughMix，荧光素钠盐，以及ddH2O。4.根据权利要求3所述的检测微小残留白血病相关融合基因的引物和探针的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的内参为自对照ABL1基因为：由SEQIDNo：4所示的正向引物ABL1-F，由SEQIDNo：5所示的反向引物ABL1-R，由SEQIDNo：7所示的探针P1，其中SEQIDNo：7所示的核苷酸序列的5'端有HEX标记，3'端有BHQ-MGB标记。5.根据权利要求3所述的检测微小残留白血病相关融合基因的引物和探针的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括质控品，所述质控品有阴性质控品和阳性质控品组成，所述的阴性质控品为ddH2O，所述的阳性质控品为质粒DNA混合液。6.根据权利要求3所述的检测微小残留白血病相关融合基因的引物和探针的试剂盒，其特征在于，检测BCR-ABL1(e13a2或e14a2)融合基因和BCR-ABL1(e1a2)融合基因和BCR-ABL1(e19a2)融合基因的数字PCR反应液中含有：10μmol/L的SEQIDNo：1～5各1μL；10μmol/L的SEQIDNo：6～7各0.5μL。7.根据权利要求3所述的检测微小残留白血病相关融合基因的引物和探针的试剂盒，其特征在于，2CN110724741A