一种定量检测BCR-ABL1融合基因的引物、探针及其试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113718021A(43)申请公布日2021.11.30(21)申请号202110875078.8(22)申请日2021.07.30(71)申请人广州达安基因股份有限公司地址510665广东省广州市高新技术开发区香山路19号(72)发明人蒋析文朱小亚王丽芳魏如涛杨美华(74)专利代理机构上海助之鑫知识产权代理有限公司31328代理人陈详(51)Int.Cl.C12Q1/686(2018.01)C12Q1/6886(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书2页说明书18页序列表4页附图5页(54)发明名称一种定量检测BCR-ABL1融合基因的引物、探针及其试剂盒(57)摘要本发明提供了一种定量检测BCR‑ABL1融合基因的引物、探针及其试剂盒。具体地，本发明利用实时荧光定量PCR技术(RQ‑PCR)，设计BCR‑ABL1融合基因主要型(P210)和次要型(P190)特异性引物和探针，靶向扩增目的基因，实现对2种融合基因快速、特异检测。本发明试剂盒中有含BCR‑ABL1融合基因主要型(P210)或次要型(P190)融合位点的人工合成大片段作为定量参考品，可对各个治疗阶段下患者体内融合基因进行定量检测。CN113718021ACN113718021A权利要求书1/2页1.一种用于检测BCR‑BAL1融合基因的引物对集，其特征在于，所述引物对集包括：第一引物对，所述第一引物对包括如SEQIDNO.:1所示的正向引物，和如SEQIDNO.:2所示的反向引物；第二引物对，所述第二引物对组包括如SEQIDNO.:3所示的正向引物；和，如SEQIDNO.:4所示的反向引物；第三引物对，所述第三引物对组包括如SEQIDNO.:5所示的正向引物；和，如SEQIDNO.:6所示的反向引物。2.一种检测BCR‑BAL1融合基因的探针集，其特征在于，所述探针集包括：SEQIDNO.7所示的第一探针；SEQIDNO.8所示的第二探针；和SEQIDNO.9所示的第三探针。3.一种用于检测BCR‑BAL1融合基因的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求所述的引物对集；和/或权利要求2所述的探针集。4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括第一容器，所述第一容器内包含第一引物探针混合液，所述引物探针混合液中包含SEQIDNO：1、SEQIDNO.:2、和SEQIDNO.:7所示的多核苷酸序列。5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括第二容器，所述第二容器内包含第二引物探针混合液，所述引物探针混合液中包含SEQIDNO：3、SEQIDNO.:4和SEQIDNO.:8所示的多核苷酸序列。6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括第三容器，所述第三容器内包含第三引物探针混合液，所述引物探针混合液中包含SEQIDNO：5、SEQIDNO.:6和SEQIDNO.:9所示的多核苷酸序列。7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括第四容器，所述第四容器内包含选自下组的一种或多种组分：热启动Taq酶、逆转录酶、和dNTP。8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括独立分装的BCR‑ABL1P210型阳性定量参考品，所述BCR‑ABL1P210型阳性定量参考品为含有BCR‑ABL1P210型目的片段的质粒；优选地，所述BCR‑ABL1P210型阳性定量参考品的浓度梯度为2×106copies/ml、2×105copies/ml、2×104copies/ml、和2×103copies/ml；所述试剂盒还包括独立分装的BCR‑ABL1P190型阳性定量参考品，所述BCR‑ABL1P190型阳性定量参考品为含有BCR‑ABL1P190型目的片段的质粒；优选地，所述BCR‑ABL1P190型阳性定量参考品的浓度梯度为2×106copies/ml、2×105copies/ml、2×104copies/ml、和2×103copies/ml；和/或所述试剂盒还包括独立分装的ABL1阳性定量参考品，所述ABL1阳性定量参考品为含有ABL1目的片段的质粒；优选地，所述ABL1阳性定量参考品的浓度梯度为2×106copies/ml、2×105copies/ml、2×104copies/ml、和2×103copies/ml。9.一种检测BCR‑BAL1融合基因的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：(1)提供待检测对象的核酸样本；(2)制备PCR反应体系并进行PCR检测：所述PCR反应体系包括BCR‑ABL1主要型反应管体系、BCR‑ABL1次要型反应管体系和ABL1反应管体系；其中，所述PBCR‑ABL1主要型反应管