检测CHO核酸残留的引物、探针、试剂盒及检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109295193A(43)申请公布日2019.02.01(21)申请号201811307204.4(22)申请日2018.11.05(71)申请人苏州蝌蚪生物技术有限公司地址215000江苏省苏州市吴中区苏州工业园区星湖街218号生物纳米科技园A4栋516室(72)发明人薛峰陈伟苏静周莉质陆寿祥吴城霖(74)专利代理机构南京利丰知识产权代理事务所(特殊普通合伙)32256代理人王茹王锋(51)Int.Cl.C12Q1/6876(2018.01)C12Q1/6851(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书2页说明书13页序列表2页附图5页(54)发明名称检测CHO核酸残留的引物、探针、试剂盒及检测方法(57)摘要本发明公开了一种检测CHO核酸残留的引物、探针、试剂盒及检测方法。所述检测CHO核酸残留的引物对包括：第一引物和第二引物，其序列分别如SEQIDNO.1、SEQIDNO.2所示。所述探针的序列如SEQIDNO.3所示。所述试剂盒包括前述引物对和探针。所述CHO核酸残留的检测方法包括：提供待检测的DNA样本，使其与前述试剂盒的PCR扩增检测的常规组件混合，形成混合液；之后利用所述试剂盒所包含的引物对与探针对所述混合液进行PCR扩增；对PCR扩增产物进行检测，判断DNA样本中CHO核酸的残留情况。本发明的检测方法及试剂盒能准确的检测出中国仓鼠源性生物制品中CHO核酸的残留情况，应用前景广阔。CN109295193ACN109295193A权利要求书1/2页1.一种检测CHO核酸残留的引物对，其特征在于包括：第一引物，其序列如SEQIDNO.1所示；第二引物，其序列如SEQIDNO.2所示。2.一种检测CHO核酸残留的探针，其特征在于，所述探针的序列如SEQIDNO.3所示。3.根据权利要求2所述的检测CHO核酸残留的探针，其特征在于：所述探针为经过荧光标记的，所述探针的5’端标记有报告荧光基团，3’端标记有淬灭荧光基团；优选的，所述报告荧光基团为FAM，所述淬灭荧光基团为TAMRA。4.一种检测CHO核酸残留的试剂盒，其特征在于包括至少一引物对和至少一探针，其中一引物对包括第一引物和第二引物，所述第一引物的序列如SEQIDNO.1所示，所述第二引物的序列如SEQIDNO.2所示，其中一探针为权利要求2-3中任一项所述的探针。5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于还包括PCR扩增检测的常规组件；优选的，所述PCR扩增检测的常规组件包括PCR反应用缓冲液、三磷酸碱基脱氧核苷酸混合液和DNA聚合酶。6.权利要求4-5中任一项所述的检测CHO核酸残留的试剂盒于检测CHO核酸残留或制备检测CHO核酸残留的产品中的用途。7.一种CHO核酸残留的检测方法，其特征在于包括：提供待检测的DNA样本；使所述待检测的DNA样本与权利要求4-5中任一项所述的检测CHO核酸残留的试剂盒的PCR扩增检测的常规组件混合，形成混合液；之后利用所述试剂盒所包含的引物对与探针对所述混合液进行PCR扩增；对PCR扩增产物进行检测，判断DNA样本中CHO核酸的残留情况。8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于包括：利用前述的试剂盒所包含的引物对与探针对所述混合液进行荧光定量PCR扩增；对PCR扩增产物的荧光强度进行实时检测，根据该荧光强度判断DNA样本中CHO核酸的残留情况。9.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于具体包括：使权利要求1所述的检测CHO核酸残留的引物对、权利要求2所述的检测CHO核酸残留的探针与权利要求4-5中任一项所述的检测CHO的试剂盒的PCR扩增检测的常规组件混合，形成混合液；用含有目的片段的CHO细胞株提取DNA作为标准品，并制备形成一系列不同浓度标准溶液，加入所述混合液中，将不同浓度标准DNA溶液作为模板进行实时荧光定量PCR检测，得到用于CHO核酸检测的标准曲线；在所述混合液中加入待检测的DNA样本或阳性样本，进行荧光定量PCR扩增；对PCR扩增产物的荧光强度进行实时检测，并于所述标准曲线对照，从而测得待检测的DNA样本中CHO核酸的残留量；优选的，所述标准溶液的浓度为0.01pg/μL～1000pg/μL；优选的，所述荧光定量PCR扩增的条件为：预热，其包括在50～60℃下保温2～5min；预变性，其包括在92～95℃下保温5～10min；2CN109295193A权利要求书2/2页PCR循环，包括40个循环，每个循环包括：依次在92～95℃下变性保温15s～30s，55～60℃退火保温30s～1min，在每个循环的延伸结束时进行荧光信号检测。10.一种包含权利要求4-5中任一项所述的检测CHO核酸残留的试剂盒的产品，所述