抗CD47/VEGF双特异性抗体及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110885377A(43)申请公布日2020.03.17(21)申请号201811058600.8(22)申请日2018.09.11(71)申请人上海洛启生物医药技术有限公司地址201321上海市浦东新区芙蓉花路500弄10号楼201室(72)发明人万亚坤朱敏沈晓宁(74)专利代理机构上海一平知识产权代理有限公司31266代理人王正君徐迅(51)Int.Cl.C07K16/46(2006.01)C12N15/13(2006.01)A61K39/395(2006.01)A61P35/00(2006.01)A61P35/02(2006.01)权利要求书2页说明书17页序列表12页附图5页(54)发明名称抗CD47/VEGF双特异性抗体及其应用(57)摘要本发明提供了抗CD47/VEGF双特异性抗体及其应用，包括：(a)抗VEGF的抗体贝伐单抗；和(b)与所述抗VEGF的抗体相连接的单价形式的抗CD47的单域抗体。本发明的双功能抗体不仅能够特异地靶向CD47和VEGF，有效阻断靶标与其配体的相互作用，还能有效抑制肿瘤细胞增殖，保留了CD47单域抗体及贝伐单抗的抗肿瘤功能，该双抗具有良好的应用前景。CN110885377ACN110885377A权利要求书1/2页1.一种双功能抗体，其特征在于，所述双功能抗体包括：(a)抗VEGF的抗体；和(b)与所述抗VEGF的抗体相连接的单价形式的抗CD47的单域抗体。2.如权利要求1所述的双功能抗体，其特征在于，所述双功能抗体从N端到C端具有式I所示的结构：其中，D各自独立地为无或抗CD47的单域抗体，且至少一个D为抗CD47的单域抗体；L1、L2各自独立地为健或接头元件；VL代表抗VEGF抗体的轻链可变区；CL代表抗VEGF抗体的轻链恒定区；VH代表抗VEGF抗体的重链可变区；CH代表抗VEGF抗体的重链恒定区；“～”代表二硫键；“-”代表肽键；其中，所述双功能抗体具有同时结合VEGF以及结合CD47的活性。3.如权利要求1所述的双功能抗体，其特征在于，所述双功能抗体从N端到C端具有式II所示的结构：其中，D代表抗CD47的单域抗体；L2代表无或接头元件；VL代表抗VEGF抗体的轻链可变区；CL代表抗VEGF抗体的轻链恒定区；VH代表抗VEGF抗体的重链可变区；CH代表抗VEGF抗体的重链恒定区；“～”代表二硫键；“-”代表肽键；其中，所述双功能抗体具有同时结合VEGF以及结合CD47的活性。4.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码权利要求1所述的双功能抗体。5.一种载体，其特征在于，所述载体含有权利要求4所述的多核苷酸。2CN110885377A权利要求书2/2页6.一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有权利要求5所述的载体或基因组中整合有权利要求4所述的多核苷酸。7.一种制备权利要求1所述抗体的方法，其特征在于，包括步骤：(i)在合适的条件下，培养权利要求6所述的宿主细胞，获得含有权利要求1所述抗体的混合物；(ii)对步骤(i)中得到的混合物进行纯化和/或分离，从而获得权利要求1所述的抗体。8.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物含有：(I)权利要求1所述的双功能抗体；和(II)药学上可接受的载体。9.一种免疫偶联物，其特征在于，所述免疫偶联物包括：(a)如权利要求1所述的双功能抗体；和(b)选自下组的偶联部分：可检测标记物、药物、毒素、细胞因子、放射性核素、或酶。10.如权利要求1所述双功能抗体或如权利要求9所述的免疫偶联物的用途，其特征在于，用于制备治疗肿瘤的药物组合物。3CN110885377A说明书1/17页抗CD47/VEGF双特异性抗体及其应用技术领域[0001]本发明属于肿瘤免疫学领域，具体地，涉及抗CD47/VEGF双特异性抗体及其应用。背景技术[0002]血管表皮生长因子家族成员—A(VEGF)，B，C，D，和胎盘生长因子均属于半胱氨酸结生长因子超家族蛋白，它们在正常情况下(如发育，损伤修复)和病理条件下(如肿瘤生长和眼内新血管形成)的血管生成，血管再生和淋巴管生成起重要作用。VEGFA在诸如内皮细胞增殖和存活，增加血管渗透性，以及趋化性和骨髓造血细胞的归巢这些对血管再生很重的功能中均起着重要的作用。VEGFA以多种亚型存在：121(VEGFA)，165，189和206，其中VEGFA165是正常组织和肿瘤组织中表达最为常见的亚型，并且被认为是最能反映VEGFA生理功能的亚型。结合VEGFA的受体有VEGFR1(也叫做Flt-1)，VEGFR2(也被称为KDR)和NP1/NP2。VEGFR2是主要调节VEGFA在细胞增殖，血管再生和血管渗透性等与肿瘤生长有关功