噻虫嗪适配体及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111206033A(43)申请公布日2020.05.29(21)申请号201811399838.7(22)申请日2018.11.22(71)申请人中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所地址215123江苏省苏州市苏州工业园区独墅湖高教区若水路398号(72)发明人裴仁军罗钰王金娥(74)专利代理机构南京利丰知识产权代理事务所(特殊普通合伙)32256代理人王茹王锋(51)Int.Cl.C12N15/115(2010.01)G01N21/64(2006.01)权利要求书1页说明书6页序列表1页附图3页(54)发明名称噻虫嗪适配体及其应用(57)摘要本发明公开了一种噻虫嗪适配体及其应用。所述噻虫嗪适配体具有SEQIDNo.1所示的序列。本发明利用SELEX方法筛选出烟碱类杀虫剂噻虫嗪的适配体序列，并利用所述噻虫嗪适配体与噻虫嗪结合前后的结构变化设计了噻虫嗪残留检测的荧光生物传感器，并藉此实现了简单、高效、高选择性的噻虫嗪残留检测，能够为环境污染物检测提供有效的帮助。CN111206033ACN111206033A权利要求书1/1页1.一种噻虫嗪适配体，其特征在于具有SEQIDNo.1所示的序列。2.一种噻虫嗪残留检测探针对，其特征在于包括：包含噻虫嗪残留检测互补序列的第一探针，其一端连接有荧光素的第一核酸序列；以及，包含噻虫嗪残留检测互补序列的第二探针，其一端连接有淬灭剂的第二核酸序列；并且，所述第一探针和第二探针部分反向互补。3.根据权利要求2所述的探针对，其特征在于：所述第一探针具有SEQIDNo.2所示的序列。4.根据权利要求2所述的探针对，其特征在于：所述第二探针具有SEQIDNo.3所示的序列。5.权利要求1所述噻虫嗪适配体或权利要求2-4中任一项所述噻虫嗪残留检测探针对在制备噻虫嗪残留检测传感器、试剂盒或检测系统中的用途。6.一种噻虫嗪残留检测传感器，其特征在于包括：将权利要求1所述噻虫嗪适配体的序列改造并形成两个反向互补序列后，在该两个互补序列的末端分别标记荧光素和淬灭剂而形成的第一探针和第二探针。7.根据权利要求6所述的噻虫嗪残留检测传感器，其特征在于：所述第一探针具有SEQIDNo.2所示的序列。8.根据权利要求6所述的噻虫嗪残留检测传感器，其特征在于：所述第二探针具有SEQIDNo.3所示的序列。9.一种试剂盒，其特征在于包括：权利要求2-4中任一项所述的噻虫嗪残留检测探针对；以及，噻虫嗪。10.一种噻虫嗪残留检测系统，其特征在于包括：权利要求2-4中任一项所述的噻虫嗪残留检测探针对，用以与待检测的噻虫嗪共同孵育而形成待检测体系；噻虫嗪，用于与所述待检测体系共同孵育；以及，荧光光谱仪，用于检测所述待检测体系在与噻虫嗪共同孵育前后的荧光强度变化。2CN111206033A说明书1/6页噻虫嗪适配体及其应用技术领域[0001]本发明涉及一种烟碱类杀虫剂适配体，特别是一种改良的噻虫嗪适配体、其筛选技术以及应用，例如在噻虫嗪残留的非标记检测中的用途，属于生物技术领域。背景技术[0002]适配体是利用指数富集配体的系统进化(systematicevolutionofligandsbyexponentialenrichment,SELEX)技术从体外庞大的核酸分子文库中筛选获得的单链DNA或RNA。适配体具有高特异性、高亲和度、易合成、易修饰、分子小、无毒以及良好的稳定性等优点，因此在生物传感器中运用十分灵活，是生物传感器理想的识别元件。SELEX技术是20世纪90年代发展起来的一种新的组合化学技术，具有经济、简单、快速、适用范围广等优点。[0003]噻虫嗪是第二代最常用的烟碱类杀虫剂之一，对昆虫的nAChR有高亲和力，能够与昆虫神经系统的烟碱型乙酰胆碱受体选择性结合，但不被乙酰胆碱酯酶分解，导致昆虫的神经系统过度兴奋，最终导致昆虫死亡。噻虫嗪对蜜蜂有经口毒性，高浓度的残留将导致采集蜂急性致死，经污染的蜂粮能引起蜜蜂行为及生理机能改变，最终导致蜂群覆灭。噻虫嗪残留物能渗入土壤并进入地下水，多种农产品上能检出噻虫嗪残留。因此发展高效检测噻虫嗪残留的方法非常必要。目前，高效液相色谱法，酶联免疫吸附法或者超临界流体萃取等方法均被用于噻虫嗪残留的检测，但是这些检测方法价格昂贵，需要一些大型仪器及有经验的实验人员辅助。与这些方法相比，生物传感器显示出了很大的优势。[0004]荧光标记的核酸适配体链发出的荧光信号被标记在互补链上的淬灭剂掩蔽后再与靶标小分子共同孵育，会发生荧光信号的变化。基于这种性质，以核酸适配体链为基础设计反向互补链，将荧光标记的核酸适配体链和反向互补淬灭链作为探针对，设计荧光生物传感器，可以实现不同的检测目的。这种方法不仅简单，方便，而