一种针对噻虫嗪的半抗原、完全抗原制备方法及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112409348A(43)申请公布日2021.02.26(21)申请号202011320306.7(51)Int.Cl.(22)申请日2020.11.23C07D417/06(2006.01)C07K14/765(2006.01)(66)本国优先权数据C07K14/77(2006.01)202011279314.12020.11.16CNC07K1/02(2006.01)(71)申请人广西大学C07K1/107(2006.01)地址530000广西壮族自治区南宁市西乡C07K1/34(2006.01)塘区大学路100号C07K16/44(2006.01)(72)发明人何丽珊张娅顾明华李雪生G01N33/577(2006.01)曾东强何惠欢何冰吕丽兰G01N33/58(2006.01)梁琼月温奇俊李鑫生李一渺G01N33/53(2006.01)易国强刘唯陈能黄光伟王艺霖(74)专利代理机构北京纪凯知识产权代理有限公司11245代理人赵静权利要求书2页说明书6页附图1页(54)发明名称一种针对噻虫嗪的半抗原、完全抗原制备方法及其应用(57)摘要本发明公开了一种噻虫嗪半抗原、完全抗原及制备方法与应用。所述噻虫嗪半抗原的结构式如式I所示。将噻虫嗪半抗原与载体蛋白偶联，制备得到噻虫嗪完全抗原。本发明的制备方法简单易行，制备得到的噻虫嗪半抗原、噻虫嗪完全抗原，可有效地刺激被免疫动物产生灵敏度高、特异性强的抗体，可用于免疫分析中，满足国内对噻虫嗪残留的检测。CN112409348ACN112409348A权利要求书1/2页1.噻虫嗪半抗原，其结构式如式I所示：2.权利要求1中式I所示噻虫嗪半抗原的制备方法，包括下述步骤：在碱性条件下，使噻虫嗪和4‑巯基苯甲酸进行反应，得到所述噻虫嗪半抗原。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述碱性条件可由氢氧化钠提供，所述噻虫嗪与氢氧化钠的摩尔比为1:2‑3；所述噻虫嗪和4‑巯基苯甲酸的摩尔比为1:1.1‑1:1.5；所述反应在溶剂中进行，所述溶剂为N,N‑二甲基甲酰胺；所述反应在加热回流条件下进行，所述反应的温度为110℃，时间为3～4小时。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述方法还包括下述步骤：反应结束后，待反应体系冷却至室温，加入水淬灭反应，调节反应体系pH值到中性并加入乙酸乙酯分层，收集有机层干燥浓缩后得到噻虫嗪半抗原粗产品；所述方法还进一步包括对上述得到的噻虫嗪半抗原粗产品进行纯化的步骤，具体如下：将噻虫嗪半抗原粗产品重新用乙酸乙酯溶解，加入100‑200的硅胶搅拌均匀，浓缩除去溶剂后柱色谱分离，得到纯化后的噻虫嗪半抗原；其中，所述柱色谱分离的洗脱剂为体积比3:1的石油醚、乙酸乙酯混合溶剂。5.一种噻虫嗪完全抗原，由权利要求1所述的噻虫嗪半抗原与载体蛋白偶联后得到。6.制备权利要求5所述噻虫嗪完全抗原的方法，包括下述步骤：a)将噻虫嗪半抗原溶于二甲基甲酰胺中，加入二环己基碳二亚胺和N‑羟基琥珀酰亚胺，室温搅拌得到A液；b)将载体蛋白溶于碳酸盐缓冲液中，得到B液；c)将所述A液与B液混合并搅拌，得到C液；d)将C液置于透析袋并于磷酸缓冲液中透析，收集透析袋中的溶液，即为噻虫嗪完全抗原；优选的，所述步骤a)中，所述噻虫嗪半抗原、二甲基甲酰胺、二环己基碳二亚胺和N‑羟基琥珀酰亚胺的用量比为20μmol∶1‑2mL∶60‑120μmol∶60‑120μmol；所述搅拌的时间为18‑24小时；所述步骤b)中，所述载体蛋白具体为牛血清蛋白；所述载体蛋白和碳酸盐缓冲液的用量比为0.4μmol∶3‑6mL；所述步骤c)中，所述搅拌的条件为：4℃‑25℃搅拌10‑12小时；所述步骤d)中，所述透析每3小时换液一次，共透析6次。7.权利要求1所述噻虫嗪半抗原或权利要求5所述噻虫嗪完全抗原在制备噻虫嗪特异性抗体中的应用。2CN112409348A权利要求书2/2页8.由权利要求5所述的噻虫嗪完全抗原制备得到的噻虫嗪特异性抗体。9.权利要求8所述的噻虫嗪特异性抗体在下述至少一方面的应用：(1)在检测噻虫嗪中的应用；(2)在制备噻虫嗪的ELISA检测用试剂盒中的应用；(3)在制备噻虫嗪的胶体金检测试纸条中的应用。10.一种检测噻虫嗪的酶联免疫试剂或试剂盒，包括权利要求5所述的噻虫嗪完全抗原和权利要求8所述的噻虫嗪特异性抗体。3CN112409348A说明书1/6页一种针对噻虫嗪的半抗原、完全抗原制备方法及其应用技术领域[0001]本发明属于生物技术领域，具体涉及一种针对噻虫嗪的半抗原、完全抗原制备方法及其应用。背景技术[0002]噻虫嗪属烟碱类杀虫剂，是烟碱型乙酰胆碱受体的作用体，主要作用于昆虫神经接合后膜，通过与烟碱