一种地龙1H NMR指纹图谱的构建方法与应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111272894A(43)申请公布日2020.06.12(21)申请号202010129845.6(22)申请日2020.02.28(71)申请人山西大学地址030006山西省太原市坞城路92号(72)发明人何盼李震宇秦雪梅(74)专利代理机构太原申立德知识产权代理事务所(特殊普通合伙)14115代理人郭海燕(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/86(2006.01)G01N30/64(2006.01)G01N30/06(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图3页(54)发明名称一种地龙1HNMR指纹图谱的构建方法与应用(57)摘要本发明属于指纹图谱构建技术领域，具体涉及一种地龙1HNMR指纹图谱的构建方法与应用。本发明采用核磁共振技术获得地龙指纹图谱及特征峰，能同时表征地龙中29个化学成分，包括氨基酸、有机酸、核苷酸类等多种代谢产物，不受物质是否具有紫外吸收、以及色谱柱是否保留的限制，能全面反映地龙的化学成分及品质，通过多元统计分析，结合所指认物质的单变量分析，可用于地龙饮片的质量均一性控制。CN111272894ACN111272894A权利要求书1/1页1.一种地龙1HNMR指纹图谱的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1，取地龙药材粉末加入到甲醇水混合溶液中，经涡旋，超声提取，离心移上清旋干得到地龙提取物；步骤2，用氘代甲醇与重水的混合溶液溶解地龙提取物，离心，移取上清液做核磁共振测试，谱图导入核磁数据处理软件，获得地龙药材1HNMR指纹图谱；步骤3，对地龙1HNMR图谱进行指认，利用对照品结合核磁共振峰的化学位移及耦合常数分析，确定地龙指纹图谱的特征峰。2.根据权利要求1所述的一种地龙1HNMR指纹图谱的构建方法，其特征在于：所述步骤1中地龙药材粉末的用量为100～500mg；所述甲醇水混合溶液中的甲醇体积浓度为20％～60％。3.根据权利要求1所述的一种地龙1HNMR指纹图谱的构建方法，其特征在于：所述步骤1中甲醇水混合溶液的体积为6mL。4.根据权利要求1所述的一种地龙1HNMR指纹图谱的构建方法，其特征在于：所述步骤1中超声提取时间为10～30min。5.根据权利要求1所述的一种地龙1HNMR指纹图谱的构建方法，其特征在于：所述步骤2中氘代甲醇与重水的体积比为1:1；所述氘代甲醇与重水的混合溶液的体积为600～1000μL。6.根据权利要求1所述的一种地龙1HNMR指纹图谱的构建方法，其特征在于：所述步骤2中离心时间为20min；离心机转速为13000r·min-1；移取上清液的体积为600μL于核磁管中。7.根据权利要求1所述的一种地龙1HNMR指纹图谱的构建方法，其特征在于：所述地龙指纹图谱的特征峰包括：亮氨酸(δ＝0.98±0.02,d,J＝8.4Hz)、异亮氨酸(δ＝1.03±0.02,d,J＝7.2Hz)、缬氨酸(δ＝1.06±0.02,d,J＝7.2Hz)、乳酸(δ＝1.33±0.02,d,J＝7.2Hz)、丙氨酸(δ＝1.49±0.02,d,J＝7.2Hz)、精氨酸(δ＝1.75±0.02,m)、乙酸(δ＝1.93±0.02,s)、脯氨酸(δ＝4.13±0.02,dd,J＝8.7Hz,6.0Hz)、琥珀酸(δ＝2.46±0.02,s)、谷氨酸(δ＝2.05±0.02,m)、谷氨酰胺(δ＝2.40±0.02,m)、二甲基甘氨酸(δ＝2.90±0.02,s)、胆碱(δ＝3.21±0.02,s)、磷脂酰胆碱(δ＝3.23±0.02,s)、氧化三甲胺(δ＝3.27±0.02,s)、甘油酯(δ＝3.62±0.02,dd,J＝4.8Hz,11.4Hz)、甘氨酸(δ＝3.53±0.02,s)、尿嘧啶(δ＝5.76±0.02,d,J＝7.8Hz)、富马酸(δ＝6.53±0.02,s)、胞苷(δ＝5.90±0.02,d,J＝4.8Hz)、酪氨酸(δ＝7.18±0.02,d,J＝8.4Hz)、组氨酸(δ＝7.98±0.02,s)、苯丙氨酸(δ＝7.40±0.02,m)、次黄嘌呤(δ＝8.22±0.02,s)、腺苷(δ＝8.35±0.02,s)、甲酸(δ＝8.47±0.02,s)、AMP(δ＝8.56±0.02,s)、烟酰胺(δ＝8.97±0.02,dd,J＝0.6Hz,2.4Hz)。8.一种地龙1HNMR指纹图谱的应用，其特征在于：应用于对地龙饮片质量的控制。9.一种地龙1HNMR指纹图谱的应用方法，其特征在于：对不同批次地龙饮片的1HNMR图谱数据进行分段积分，通过多元统计分析方法，结合指认化学物质积分数据的半定量分析，比较不同批次地龙饮片药材质量，从而控制地龙饮片的质量。2CN1112728