一种中药复方制剂指纹图谱的建立方法及其指纹图谱.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111289648A(43)申请公布日2020.06.16(21)申请号202010157005.0G01N30/54(2006.01)(22)申请日2020.03.09G01N30/60(2006.01)G01N30/86(2006.01)(71)申请人四川省中医药科学院地址610041四川省成都市武侯区人民南路四段51号(72)发明人张爱军李帅唐玉朱红梅毛九州陈东辉(74)专利代理机构北京高沃律师事务所11569代理人赵晓琳(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/06(2006.01)G01N30/14(2006.01)G01N30/32(2006.01)G01N30/34(2006.01)权利要求书3页说明书21页附图3页(54)发明名称一种中药复方制剂指纹图谱的建立方法及其指纹图谱(57)摘要本发明涉及药物分析领域，尤其涉及一种中药复方制剂指纹图谱的建立方法及其指纹图谱。本发明提供的中药复方制剂指纹图谱的建立方法，具有准确度高、稳定性高、重复性好的特点；本发明通过对11个不同批次的中药复方制剂进行检测，结果表明，相同位置色谱峰的相对保留时间的RSD均在5％之内，说明本发明提供的指纹图谱具有较好的重现性，本发明提供的中药复方制剂指纹图谱的建立方法可靠性较高；而且本发明由上述方法建立的中药复方制剂指纹图谱，具有29个达到有效分离的共有峰，所述指纹图谱能够有效地表征中药复方制剂的质量，有利于全面监控药物的质量。CN111289648ACN111289648A权利要求书1/3页1.一种中药复方制剂指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)采用甲醇对中药复方制剂进行超声提取，得到供试品溶液；(2)采用高效液相色谱法对供试品溶液进行测试，根据《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012A版》，由得到的色谱数据生成中药复方制剂指纹图谱；所述高效液相色谱法的色谱条件为：色谱柱：C18色谱柱；检测波长：200～220nm；流动相：流动相A为体积分数0.05％～0.3％的磷酸水溶液，流动相B为乙腈；洗脱方式为梯度洗脱，所述梯度洗脱的洗脱程序如表1所示：表1梯度洗脱程序2.根据权利要求1所述的中药复方制剂指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述中药复方制剂包括干蟾皮、壁虎、金荞麦、喜树果、西洋参、仙鹤草和灵芝；所述干蟾皮、壁虎、金荞麦、喜树果、西洋参、仙鹤草和灵芝的质量比为1～9:1～9:30～50:20～40:6～16:10～30:6～24。3.根据权利要求1所述的中药复方制剂指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述色谱条件还包括：流速：0.5～1.5mL/min；柱温：15～35℃；色谱柱规格：250mm×4.6mm，5μm；进样体积：5～20μL；进样浓度：0.01g/mL～1.00g/mL。4.根据权利要求1所述的中药复方制剂指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备方法包括以下步骤：(a)将中药复方制剂与甲醇混合后超声，然后过滤，滤液减压浓缩，得到浓缩液；所述超声的功率为200～400W，频率为30～50kHz，时间为20～60min；2CN111289648A权利要求书2/3页(b)采用甲醇水溶液将浓缩液进行定容，然后将定容液中的上清液进行微孔滤膜过滤，得到供试品溶液。5.根据权利要求4所述的中药复方制剂指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述步骤(b)中甲醇水溶液的体积浓度为10％～100％。6.根据权利要求4所述的中药复方制剂指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述步骤(b)中微孔滤膜的孔径为0.2～0.5μm。7.根据权利要求1所述的中药复方制剂指纹图谱的建立方法，其特征在于，还包括配制混合对照品溶液，所述混合对照品溶液的配制方法包括以下步骤：将人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、喜树碱、人参皂苷Rb1、表儿茶素和蟾蜍噻咛对照品溶于甲醇中，得到混合对照品溶液；采用与供试品溶液相同的高效液相色谱条件对混合对照品溶液进行测试，得到混合对照品溶液的色谱图；将混合对照品溶液的色谱图与权利要求1得到的中药复方制剂指纹图谱进行对比，用于指认中药复方制剂指纹图谱中的色谱峰。8.权利要求1～7任一项所述方法得到的中药复方制剂指纹图谱，其特征在于，以人参皂苷Rb1色谱峰为参照，所述中药复方制剂指纹图谱包括29个共有峰，具体如下：1号峰，相对保留时间为0.064；2号峰，相对保留时间为0.079；3号峰，相对保留时间为0.088；4号峰，相对保留时间为0.097；5号峰，相对保留时间为0.108；6号峰，相对保留时间为0.119；7号峰，相对保留时间为0.134；8号峰，相对保留时间为0.143；9号峰，相对保留时间为0.160；10号峰，