氟吡甲禾灵半抗原、人工抗原和抗体及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111333570A(43)申请公布日2020.06.26(21)申请号202010145334.3(22)申请日2020.03.05(71)申请人北京望尔生物技术有限公司地址102206北京市昌平区回龙观镇高新四街8号1幢512室申请人北京勤邦生物技术有限公司(72)发明人崔廷婷朱亮亮万宇平杜玲刘玉梅张彩丽郭春梅(51)Int.Cl.C07D213/643(2006.01)C07K14/765(2006.01)C07K14/77(2006.01)C07K14/795(2006.01)C07K16/44(2006.01)G01N33/53(2006.01)权利要求书2页说明书6页附图1页(54)发明名称氟吡甲禾灵半抗原、人工抗原和抗体及其制备方法和应用(57)摘要本发明公开了氟吡甲禾灵半抗原、人工抗原和抗体及其制备方法和应用，本发明提供的氟吡甲禾灵半抗原既最大程度保留了氟吡甲禾灵的特征结构，使得氟吡甲禾灵半抗原的免疫原性明显增强，又具有可以与载体蛋白发生偶联的羧基；用氟吡甲禾灵半抗原与载体蛋白偶联后得到的氟吡甲禾灵人工抗原去免疫动物，更有利于刺激动物免疫应答产生特异性更强、灵敏度更高的抗体，经检测氟吡甲禾灵抗体的灵敏度可达0.1μg/L，与其他芳氧苯氧丙酸酯类除草剂的交叉反应率低，为后续建立氟吡甲禾灵的各种免疫分析方法提供了基础。CN111333570ACN111333570A权利要求书1/2页1.一种氟吡甲禾灵半抗原，其特征在于，其具有如下结构式：2.如权利要求1所述的氟吡甲禾灵半抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)在碱性条件下，使(R)-(+)-2-(4-羟基苯氧基)丙酸甲酯与[2-氯-5-(三氟甲基)吡啶]甲醇发生反应，得到中间体1，所述中间体1具有结构式2)将所述中间体1与琥珀酸酐发生反应，得到氟吡甲禾灵半抗原。3.如权利要求2所述的氟吡甲禾灵半抗原的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中，所述碱性条件由氢化钠提供，所述(R)-(+)-2-(4-羟基苯氧基)丙酸甲酯、[2-氯-5-(三氟甲基)吡啶]甲醇、氢化钠的物质的量之比为1:1.1:2；所述反应在溶剂中进行，所述溶剂为二甲基亚砜；所述反应条件为：油浴加热80℃反应6h；所述步骤1)反应结束后，还包括对反应体系进行后处理的步骤，具体如下：将反应体系冷却到室温，加入水，加乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，蒸干，用乙腈和正己烷体积比为1:10的混合溶剂重结晶获得中间体1。4.如权利要求2所述的氟吡甲禾灵半抗原的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中，所述中间体1、琥珀酸酐的物质的量之比为1:1；所述反应在溶剂中进行，所述溶剂为吡啶；所述反应条件为：油浴加热65℃反应4h；所述步骤2)反应结束后，还包括对反应体系进行后处理的步骤，具体如下：将反应体系旋蒸除去吡啶，用硅胶柱纯化，然后用乙酸乙酯和石油醚体积比为1:3的混合溶剂洗脱分离获得氟吡甲禾灵半抗原。5.一种氟吡甲禾灵人工抗原，其特征在于，其是载体蛋白和权利要求1所述的氟吡甲禾灵半抗原偶联得到的偶联物。6.如权利要求5所述的氟吡甲禾灵人工抗原，其特征在于，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清蛋白、人血清白蛋白或血蓝蛋白。7.如权利要求5或6所述的氟吡甲禾灵人工抗原的制备方法，其特征在于，采用碳二亚胺法将载体蛋白偶联于权利要求1所述氟吡甲禾灵半抗原的羧基上。8.一种氟吡甲禾灵抗体，其特征在于，它是由权利要求5所述的氟吡甲禾灵人工抗原经动物免疫得到，其能与氟吡甲禾灵发生特异性免疫反应。2CN111333570A权利要求书2/2页9.一种权利要求8所述的氟吡甲禾灵抗体在检测氟吡甲禾灵残留中的应用。3CN111333570A说明书1/6页氟吡甲禾灵半抗原、人工抗原和抗体及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明属于食品安全检测领域。更具体地，本发明涉及氟吡甲禾灵半抗原、人工抗原和抗体及其制备方法和应用。背景技术[0002]氟吡甲禾灵(haloxyfop-methyl)是一种芳氧苯氧丙酸类除草剂，具有杀草快、内吸作用强及对作物高度安全等特点，广泛用于阔叶作物田中禾本科杂草的防除，如大豆、花生、油菜、棉花、油葵、马铃薯和蔬菜等。但其药效稳定，不易分解，加上使用不当，很容易造成作物及后续加工产品中残留量超标，从而可能危害人体健康。我国国家标准GB2763-2019《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》中规定了不同食品中氟吡甲禾灵的残留限量。[0003]目前，国内外检测氟吡甲禾灵主要采用气相色谱法、气相色谱-质谱法和液相色谱串联质谱法等分析方法，存在样品前处理繁琐、检测时间长、仪器贵重等缺点，所以在我国无法得到广泛应用，并且不符合现场检测“