氟乐灵半抗原及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106928079A(43)申请公布日2017.07.07(21)申请号201710177395.6(22)申请日2017.03.21(71)申请人广东第二师范学院地址510303广东省广州市海珠区新港中路351号(72)发明人穆洪涛李轩陈雪贞贺帆丽刘凤银袁学文(74)专利代理机构广州粤高专利商标代理有限公司44102代理人邓义华廖苑滨(51)Int.Cl.C07C229/18(2006.01)C07C227/18(2006.01)C07K16/44(2006.01)权利要求书2页说明书7页(54)发明名称氟乐灵半抗原及其制备方法和应用(57)摘要本发明公开了氟乐灵半抗原及其制备方法和应用，其具有如下结构式：其中，R为-(CH2)n-，n＝1-4或-CH＝CH-或本发明的六种半抗原均是在氨基位点上衍生连接手臂，具有活性羧基，与载体蛋白偶联后能使机体产生效价高，能识别氟乐灵农药共有结构的特异抗体。本发明的半抗原化合物，不仅合成方法简便、纯度较高，而且能应用于合成适于动物免疫的抗原体系，弥补了国内氟乐灵免疫学检测方法技术领域的空白，为氟乐灵免疫检测方法的进一步发展奠定了基础。CN106928079ACN106928079A权利要求书1/2页1.一种氟乐灵半抗原，其特征在于，具有如下结构式：其中，R为-(CH2)n-，n＝1-4或-CH＝CH-或2.如权利要求1所述的氟乐灵半抗原，其特征在于，分子结构具体为：3.如权利要求1所述的氟乐灵半抗原，其特征在于，分子结构具体为：4.如权利要求2所述的氟乐灵半抗原的合成方法，其特征在于，包括如下步骤：在催化剂存在下，将底物与烷基化试剂进行烷基化反应，纯化后获得仲胺中间体，仲胺中间体进行水解反应获得第二中间体，第二中间体再与4-氯-3,5-二硝基三氟甲苯混合反应，经纯化后获得目标半抗原分子。5.如权利要求4所述的氟乐灵半抗原的合成方法，其特征在于，半抗原结构为1c时，底物为丙烯酸乙酯，烷基化试剂为正丙胺；半抗原结构为2c、3c、4c时，底物分别为2-吡咯烷酮、戊内酰胺、己内酰胺，烷基化试剂均为正溴丙烷。6.如权利要求3所述的氟乐灵半抗原的合成方法，其特征在于，包括如下步骤：底物与2CN106928079A权利要求书2/2页正丙胺通过酰基化反应，生成含酯基的仲胺中间体，含酯基的仲胺中间体再与4-氯-3,5-二硝基三氟甲苯反应，经纯化后获得第二中间体，第二中间体再进行水解反应。7.如权利要求6所述的氟乐灵半抗原的合成方法，其特征在于，半抗原结构为5c时，底物为4-溴巴豆酸乙酯；半抗原结构为6c时，底物为4-溴甲基苯甲酸甲酯。8.一种氟乐灵人工抗原，其特征在于：将权利要求1-3任一项所述氟乐灵半抗原或由权利要求4-7任意所述方法直接得到的氟乐灵半抗原与载体蛋白偶联得到。9.一种氟乐灵抗体，其特征在于：所述氟乐灵抗体采用权利要求8所述的人工抗原制备得到，所述氟乐灵抗体为多克隆抗体、单克隆抗体或基因工程抗体。3CN106928079A说明书1/7页氟乐灵半抗原及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明涉及免疫学技术领域，具体涉及氟乐灵半抗原及其制备方法和应用。背景技术[0002]氟乐灵(trifluralin)是一种重要的选择性芽前二硝基苯胺类(dinitroaniline)除草剂，广泛用于大豆、大麦、蔬菜及水果等作物，防除一年生禾本科杂草及部分阔叶杂草。氟乐灵虽属低毒农药，但长期暴露实验表明会对肝脏和肾脏造成损伤，在高剂量暴露下会造成胎儿的体重和身高偏低并增加流产风险。因氟乐灵农药的广泛使用，使其在土壤和水体当中的残留普遍存在，特别是能够在水产品(鱼、虾、蟹)体内富集，从而对水产品的食用安全带来巨大隐患。[0003]为了避免氟乐灵除草剂的潜在危害，很多国家对其使用进行了限制。欧盟2015年对氟乐灵制定新的限量标准，水果、蔬菜、谷物及动物源食品中氟乐灵的最大残留限量(MRLs)为0.01mg/kg。日本对进口水产品中氟乐灵最大残留限量为0.001mg/kg。[0004]目前农产品中氟乐灵的检测通常使用仪器分析的方法，如紫外光谱、高效液相色谱及液质联用、气相色谱、毛细管电泳等。以上的分析方法具有准确、灵敏的特点，但由于仪器昂贵、运行成本高难以全面推广。实践证明，以快速检测方法对大量样品进行初筛，然后对其中阳性样品进行仪器确证是提高检测效率、降低成本的有效方式，符合我国国情。在现有快速检测技术中，基于抗原-抗体特异性识别的免疫检测技术由于具有灵敏、快速、准确、成本低廉且可实现现场检测等优势，被认为是21世纪最具竞争性和挑战性的超微量检测技术。[0005]关于氟乐灵免疫检测的文献国外仅有数篇报道。BruceRiggle于1991年