一种TaqMan探针法的CHO宿主细胞DNA残留检测试剂盒及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111394434A(43)申请公布日2020.07.10(21)申请号202010306407.2(22)申请日2020.04.17(71)申请人依科赛生物科技（太仓）有限公司地址215434江苏省苏州市太仓市太仓港经济技术开发区滨江大道88号(72)发明人习杨陈旭陈刚Y·建国(74)专利代理机构上海卓阳知识产权代理事务所(普通合伙)31262代理人曹翠娟(51)Int.Cl.C12Q1/6851(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书8页序列表1页附图4页(54)发明名称一种TaqMan探针法的CHO宿主细胞DNA残留检测试剂盒及其应用(57)摘要本发明涉及一种TaqMan探针法的CHO宿主细胞DNA残留检测试剂盒及其应用，所述的试剂盒包含：CHODNAControl，DNADilutionBuffer，2xMaxDetectqPCRMix，10xCHODetectionMix；本发明还涉及上述试剂盒的用途和使用方法。试剂盒中包含制备标准曲线的DNA参考品CHODNAControl，已溯源至国家标准品，利用Taqman探针定量PCR方法，能快速、特异地检测fg水平的CHO宿主细胞的DNA残留。本试剂盒适用于生物制药的中间产物到最终成品的不同样本类型，检测结果准确可靠，精密度高，可检测浓度范围为0.3ng/μL-3fg/μL。CN111394434ACN111394434A权利要求书1/1页1.一种用于检测CHO宿主细胞DNA残留的引物对，其特征在于，所述引物对为SEQIDNO:1所示的正向引物和SEQIDNO:2所示的反向引物。2.一种用于检测CHO宿主细胞DNA残留的反应体系，其特征在于，所述的反应体系为实时荧光定量PCR反应体系，包含权利要求1所述的引物对和SEQIDNO:3所示的探针。3.权利要求2所述的反应体系在制备CHO宿主细胞DNA残留检测的试剂盒中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的CHO宿主细胞DNA残留检测是适用于但不限于CHO细胞表达或生产的治疗蛋白质药物、重组疫苗或单克隆抗体。5.一种用于检测CHO宿主细胞DNA残留的方法，其特征在于，所述的方法为：使用权利要求2所述的反应体系对待测样本提取DNA后进行实时荧光定量PCR，根据所获得的标准曲线，计算得到待检样本中CHO细胞DNA的量。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的待测样本可为但不限于CHO细胞表达或生产的治疗蛋白质药物、重组疫苗或单克隆抗体。7.一种TaqMan探针法的CHO宿主DNA残留检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包含CHODNAControl，DNADilutionBuffer，2xMaxDetectqPCRMix，10xCHODetectionMix；所述的DNADilutionBuffer中含有NaN3；所述的10xCHODetectionMix中含有权利要求1所述的引物对和SEQIDNO:3所示的探针。8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述的CHODNAControl浓度为30ng/μL。9.权利要求7所述的试剂盒的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：a)样本通过前处理试剂盒提取DNA后，利用DNADilutionBuffer稀释到合适浓度；b)将CHODNAControl利用DNADilutionBuffer十倍梯度稀释，生成6个浓度的标准品：300pg/μL，30pg/μL，3pg/μL，300fg/μL，30fg/μL，3fg/μL；c)根据要检测的数量配置PCR反应混合液，依次加入NegativeControl(water)，10xCHODetectionMix，2xMaxDetectqPCRMix，混匀后分装于用作荧光定量PCR的0.2mL的八连管或96孔板中；d)将阴性对照，a)中稀释好的样本，b)中稀释好的标准品依次加入已分装的PCR反应混合液中，混匀后放入定量PCR仪进行检测；e)根据检测结果绘制标准曲线，计算待测样本中含有的CHO宿主DNA的浓度。10.根据权利要求9所述的使用方法，其特征在于，所述的DNADilutionBuffer中NaN3的含量比例是1/10000。2CN111394434A说明书1/8页一种TaqMan探针法的CHO宿主细胞DNA残留检测试剂盒及其应用技术领域[0001]本发明涉及分子生物学技术领域，具体地说，是一种TaqMan探针法的CHO宿主细胞DNA残留检测试剂盒及其应用。背景技术[0002]TaqMan荧光探针是一种寡核苷酸探针，其5’端携带荧光基团，如FAM、TET、VIC、HEX等，3’端携带淬灭基团，如TAMRA、BHQ等