一种软骨修复材料、软骨重建生物支架及制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111701075A(43)申请公布日2020.09.25(21)申请号202010585803.3A61L27/54(2006.01)(22)申请日2020.06.24B33Y10/00(2015.01)B33Y70/00(2020.01)(71)申请人亘元（天津）生物医药科技有限公司B33Y80/00(2015.01)地址300457天津市滨海新区开发区洞庭路220号天津国际生物医药联合研究院实验楼S1408(72)发明人王鹏(74)专利代理机构天津诺德知识产权代理事务所(特殊普通合伙)12213代理人栾志超(51)Int.Cl.A61L27/26(2006.01)A61L27/24(2006.01)A61L27/22(2006.01)A61L27/38(2006.01)权利要求书2页说明书14页(54)发明名称一种软骨修复材料、软骨重建生物支架及制备方法(57)摘要本发明提供一种软骨修复材料、软骨重建生物支架及制备方法，软骨修复材料包括生物基质和固化液，其中，生物基质包括胶原蛋白、纤连蛋白和软骨形态发生蛋白，混合制成溶液或冻干粉形式进行使用；固化液包括DMEM培养基、血清和Hepes缓冲液；使用时，既可以将生物基质和固化液混合后直接填充到软骨缺损处，也可以在体外预先固化成型，做成软骨重建生物支架，再用于软骨贴补。使用时，还可以包括软骨细胞或干细胞，从而进一步提高软骨修复材料的分化能力。本发明的有益效果是：能够有效填充软骨上的缺损，保证机械强度的同时还具有软骨传导和诱导能力；另外软骨修复材料能够保持被移植的软骨细胞在缺损位置上有长久保留并保持分化能力，促进其再生。CN111701075ACN111701075A权利要求书1/2页1.一种软骨修复材料，其特征在于：包括生物基质和固化液，生物基质由胶原蛋白、纤连蛋白和软骨形态发生蛋白组成；固化液包括DMEM培养基、血清和Hepes缓冲液。2.根据权利要求1所述的软骨修复材料，其特征在于：还包括软骨细胞或干细胞。3.根据权利要求1或2所述的软骨修复材料，其特征在于：所述胶原蛋白为I型胶原蛋白，所述I型胶原蛋白为鼠尾胶原、牛跟腱胶原或重组人胶原蛋白，所述I型胶原蛋白浓度为2-10mg/mL，优选为4-8mg/mL，进一步优选为6mg-7mg/mL；优选地，所述I型胶原蛋白为鼠尾胶原，制备方法如下：取鼠尾表皮杀菌处理，取鼠尾中间段尾腱，并去除尾腱上多余的多糖及脂肪得到预处理尾腱；向预处理尾腱中加入预冷醋酸，再加入胃蛋白酶，低温震荡反应至溶液澄清透明，离心取上清；向上清液中加入氯化钠析出并收集蛋白沉淀，再通过透析纯化沉淀物得到鼠尾胶原；优选地，按照投料比为1:10-100向预处理尾腱中加入0.01-0.1M预冷醋酸；优选地，胃蛋白酶添加量为体积比0.5-5％；优选地，收集蛋白沉淀具体为：向上清液中加入2M氯化钠，沉淀2-8h，离心去上清后向沉淀物中再次加入0.01-0.1M预冷醋酸重悬溶解，再重复加入2M氯化钠析出并重新收集蛋白沉淀；优选地，采用30-50KDa透析膜。4.根据权利要求1或2所述的软骨修复材料，其特征在于：所述纤连蛋白为重组人源截断型胶原蛋白或猪血纤连蛋白，含量为100-1000ug/mL。优选地，所述纤连蛋白为重组人源截断型胶原蛋白，序列如SEQNO：1所示。5.根据权利要求1或2所述的软骨修复材料，其特征在于：所述软骨形态发生蛋白为软骨组织提取物或重组人软骨源性形态发生蛋白，所述重组人软骨源性形态发生蛋白为CDMP1或CDMP2，含量为10-200ng/mL，优选为80-120ng/mL。优选地，所述软骨形态发生蛋白为重组人软骨源性形态发生蛋白CDMP1，序列如SEQNO：2所示。6.根据权利要求1或2所述软骨修复材料，其特征在于：固化液为由50-80％的2×DMEM培养基、10-30％的血清、1-5％的10-50mM的Hepes缓冲液组成的溶液；优选地，固化液为由75-80％的2×DMEM培养基、15-25％的血清、2-4％的20-30mM的Hepes缓冲液组成的溶液。7.由权利要求1-6中任一所述软骨修复材料体外构建软骨重建生物支架的方法，其特征在于：向固化液中添加生物基质，混匀后转入模具固化培养，修剪后形成能够用于软骨损伤修复的软骨重建生物支架；优选地，预先使用固化液重悬软骨细胞或干细胞，再加入生物基质。或，混匀后作为3D打印生物墨水，根据损伤三维结构3D打印得到软骨重建生物支架。8.使用权利要求7所述的软骨重建生物支架构建方法构建得到的软骨重建生物支架在软骨修复中的应用，其特征在于：将软骨重建生物支架通过生物胶贴敷于软骨损伤区，优选地，生物胶为纤维蛋白连接胶。9.包括权利要求1-6